Resumen
The invention relates to diruthenium compounds with an open-paddlewheel structure, to the stabilisation thereof, to the production method thereof, and to methods for using said compounds in the analysis of the secondary and tertiary structure of RNA, particularly in the determination of intersections between helices or the transition between helices and loops. The invention also relates to a kit containing diruthenium compounds with an open-paddlewheel structure and to the appropriate means for using same in the analysis of the structure of RNA.
Reivindicaciones
REIVINDICACIONES 1. Compuestos de dirrutenlo oon estructura de rueda de paletas abiertaen-peddlewhee/) de formula: <img class="EMIRef" id="411445509-imgf000015-0001" /> donde los dos ¿tomos de Ru, unidos por enlace metal-metal, están soportados por tres Hgandos puente (L-L) que forman, junto a los centros metáleos, un añilo; donde las dos posiciones ecuatoriales (*) y las dos posiciones axiales (**) están libres u ocupadas por Hgandos monodentados y/o bidentados quelato; con la salvedad de [ <img class="EMIRef" id="411445509-imgf000015-0003" /> <img class="EMIRef" id="411445509-imgf000015-0002" /> 2. Compuestos de dinutonio oon estructura de rueda de paletas abiertaen-peddlewhee/) según la reivindicación 1 en los que tos ligandos puente (L-L) se seleccionan del grupo formado por rormamkJinato, guanidktato, triazenuro, aminopiridinato, amidato, carboxilato, hidroxipirídinato, acetamidinato y/o benzamidinato. 3. Compuestos de dimiten» oon estructura de rueda de patotas abiertaen-peddlewhee/) según cualquiera da las reivindicaciones 1-2 en tos que al menos una de las posiciones axiales (**) está ocupada por dimetilsulfoxido (DMSO) y/o etanoJ. 4. Disolución de un completo de drrutenk) con estructura de rueda de paletos abierta(open-peddlewhee/) según se define en la reivirxlicadón 3, en medio acuoso. 5. Método para elaborar compuestos de dirrutenio con estructura de rueda de paletas abierta (open-paddlewheel) que comprende los siguientes pasos: a) sintetizar compuestos de fórmula <img class="EMIRef" id="411445509-imgf000016-0004" /> ] a partir de mediante sustitución parcial de los grupos <img class="EMIRef" id="411445509-imgf000016-0001" /> carboxilato, b) sintetizar compuestos de fórmula <img class="EMIRef" id="411445509-imgf000016-0005" /> mediante la adición de ácido hidrácído (ΗΧ') a una suspensión de <img class="EMIRef" id="411445509-imgf000016-0006" /> <img class="EMIRef" id="411445509-imgf000016-0003" /> y, opcionalmente, c) sintetizar otros compuestos de fórmula <img class="EMIRef" id="411445509-imgf000016-0002" /> mediante intercambio de ligandos haluro X<*>por ligandos pseudohaluro X" seleccionados del grupo formado por azida, tiocianato y/o cianato. 6. Método para elaborar compuestos de dirrutenio con estructura de rueda de paletas abierta (open-paddlewheel), según la reivindicación 5, en los que los ligandos puente (L-L) se seleccionan del grupo formado por: formamidinato, guanidinato, triazenuro, aminopirídinato, amidato, carboxilato, hidroxiptridinato, acetamidinato y/o benzamidinato. 7. Método para elaborar compuestos de dirrutenio con estructura de rueda de paletas abierta (open-paddlewheel), según cualquiera de las reivindicaciones 5-6, en el que el paso a) se realiza por síntesis solvotermal asistida por microondas. 8. Método para la determinación de las intersecciones entre hélices y/o de la transición entre hélices y bucles en moléculas de ARN que incluye: a) inducir el plegado en conformación nativa de ARN procedente de una muestra aislada o sintetizado in vibro, b) tratar el ARN plegado con una disolución de compuesto de dirrutenio con estructura de rueda de paletas abierta (open-paddlewheel), c) utilizar el ARN tratado con dirrutenio con estructura de rueda de paletas abierta como molde en reacciones de transcripción reversa (RT) con cebadores marcados, d) identificar las paradas específicas de la RT del paso c). 9. Método según la reivindicación 8 en el que el compuesto de dirrutenio de los pasos b) y c) tiene la fórmula (i) donde los dos átomos de Ru, unidos por enlace metal-metal, están soportados por tres ligandos puente (L-L) que forman, junto a los centros metálicos, un anillo; donde las dos posiciones ecuatoriales (*) y las dos posiciones axiales (**) están libres u ocupadas por ligandos monodentados y/o bidentados quelato. 10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 8-9 en el que ligandos puente de los compuestos de dirrutenio de los pasos b) y c) se seleccionan del grupo formado por: formamidinato, guanidinato, triazenuro, aminopiridinato, amidato, carboxilato, hidroxipirídinato, acetamidinato y/o benzamidinato. 11. Método según cualquiera de las reivindicaciones 8-10 en el que el compuesto de dirrutenio de los pasos b) y c) está estabilizado con DMSO o con etanol. 12. Método según cualquiera de las reivindicaciones 8-11 en el que el compuesto de dirrutenio de los pasos b) y c) se utiliza en medio acuoso. 13. Método según cualquiera de las reivindicaciones 8-12 en el que se incluye un ARN-control plegado y diluido en el mismo medio que el ARN del paso a). 14. Método según cualquiera de las reivindicaciones 8-13 en el que los cebadores utilizados en la RT están marcados con en su extremo 5'. 15. Método según cualquiera de las reivindicaciones 13-14 que incluye, en el paso d), las siguientes fases: 1) realizar reacciones de secuenciación del ARN procedente de la muestra aislada o sintetizado in vitro, 2) separar los productos de la secuenciación de la fase 1) junto con los productos de la RT del paso c), 3) detectar los productos de la secuenciación y los productos de la RT, 4) cuantrñcar la intensidad de los productos de parada de la RT con respecto al ARN-control. 16. Uso de complejos de dirrutenio con estructura de rueda de paletas abierta o de sus disoluciones en el estudio y análisis del ARN. 17. Combinaciones de ARN con compuestos de dirrutenio con estructura de rueda de paletas abierta. 18. Kit para determinar las intersecciones entre hélices y/o la transición entre hélices y bucles en moléculas de ARN que incluye uno o varios compuestos de dirrutenio con estructura de rueda de paletas abierta y un tampón adecuado para el tratamiento del ARN. 19. Kit según la reivindicación 18 en el que el/los compuestos de dirrutenio con estructura de rueda de paletas abierta tiene la fórmula (i) donde los dos átomos de Ru, unidos por enlace metal-metal, están soportados por tres ligandos puente (L-L) que forman, junto a ios centros metálicos, un anillo; donde las dos posiciones ecuatoriales (*) y las dos posiciones axiales (**) están libres u ocupadas por ligandos monodentados y/o bidentados quelato. 20. Kit según la reivindicación 19 en el que los ligandos puente de los compuestos de dirrutenio se seleccionan del grupo formado por: formamidinato, guanidinato, triazenuro, aminopiridinato, amidato, carboxilato, hidroxipiridinato, acetamidinato y/o benzamidinato. 21. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 19-20 en el que el/los compuestos de dirrutenio están estabilizados con DMSO o con etanol. 22. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 19-21 que incluye disolvente seleccionado del grupo formado por DMSO y etanol.
