madrid2i

Resumen

The invention concerns the design and implementation of a method for desulfurization of dibenzothiophene, in which a recombinant strain of Pseudomonas putida KT2442 is used as biocatalyst, wherein the desulfurization genes dszA, dszC and dszB isolated from Rhodococcus erythropolis IGTS8 ATCC53968 coding for two monooxygenases and one desulfinase respectively and the gene hpaC of Escherichia coli W ATCC11105 coding for a flavin:NADH reductase have been cloned in said recombinant strain by constructing a plasmid with a broad host spectrum called pBG8. Said method considerably increases DBT desulfurization speed of the biocatalyst thereby improving its yield in the utilization thereof in biodesulfurization processes of oil and/or oil fractions.

Reivindicaciones

1. 1. Un procedimiento para desulfurar dibenzotiofeno utilizando unabacteria recombinante de Pseudomonas putida en contacto con eldibenzotiofeno caracterizado porque dicha bacteria recombinante seobtiene de la siguiente forma: 2. Aislar el fragmento de DNA que codifica las enzimas DszA, DszB yDsC de la bacteria Rhodococcus erythropolis IGTS8 y que sonnecesarias para la desulfuración del dibenzotiofeno, 3. Aislar el fragmento de DNA que codifica en Escherichia coliW ATCC11105 la enzima flavin:NADH reductasa HpaC que proporciona elFMNH2 necesario para la desulfuración del dibenzotiofeno, 4. Construcción de un plásmido de amplio espectro de huéspedconteniendo un operón que porta las secuencias que codifican DszA, DszB,DszC y HpaC bajo el control de un promotor regulable y funcional en ungran número de bacterias gram-negativas, e 5. Introducción de dicho plásmido en las células Pseudomonas. 6. 2. Procedimiento según la reivindicación 1 caracterizado porque enla obtención de la bacteria recombinante: 7. El operón contiene los genes dsza, dszb, DszC que codifican lasmonooxigenasas DszA y DszC y la desulfinasa DszB de Rhodococcuserythropolis IGTS8 y el gen hpac que codifica una flavin:NADH reductasade Escherichia coli W ATCC11105, 8. El plásmido construido es pBG8, y 9. La introducción de dicho plásmido se realiza en células deP. putida KT2442 y que se corresponde con la bacteria CECT 5279. 10. 3. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1y 2 caracterizado porque la flavin:NADH reductasa utilizada es homólogaa la flavin:NADH reductasa HpaC de Escherichia coli W ATCC11105. 11. 4. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1a la 3 caracterizado porque la bacteria recombinante se cultiva en unmedio que permita la desulfuración del dibenzotiofeno. 12. 5. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ala 4 caracterizado porque la bacteria recombinante se cultiva en mediosque permitan la expresión de las proteínas DszA, DszB, DszC y HpaC yporque estas proteínas se utilizan, tanto dentro de células encrecimiento como dentro de células en reposo, para la desulfuracióndel dibenzotiofeno. 13. 6. Un procedimiento para desulfurar dibenzotiofeno utilizando unabacteria recombinante distinta de Pseudomonas putida caracterizadoporque la bacteria transformada y utilizada para desulfurar dibenzotiofenoporta el plásmido pBG8 descrito en las reivindicaciones 1 y 2. 14. 7. Un procedimiento según la reivindicacion 6 caracterizado porquela flavin:NADH reductasa utilizada es homóloga a la flavin:NADH reductasaHpaC de Escherichia coli W ATCC11105. 15. 8. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 6 y7 caracterizado porque las células transformadas se cultivan en un medioque permita la desulfuración del dibenzotiofeno. 16. 9. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 6 ala 8 caracterizado porque las células transformadas se cultivan en mediosque permitan la expresión de las proteínas DszA, DszB, DszC y HpaC yporque estas proteínas se utilizan, tanto dentro de células en crecimientocomo dentro de células en reposo, para la desulfuración deldibenzotiofeno.

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