madrid2i

Resumen

The invention in question relates to a method of identifying compounds that give rise to or inhibit endoplasmic reticulum stress or oxidative stress. Said method is based on the transformation of cells, stably, with a vector which expresses a reporter gene under the control of the DDIT3 (also called CHOP) gene promoter. This promoter comprises nucleotides -1626 to +60 of said gene, there being two variants thereof: -1507 C/G. While variant -1507 C is not activated under oxidative stress conditions, -1507 G readily responds to this stimulus. Furthermore, both promoters are activated under endoplasmic reticulum stress conditions, or in situations where both conditions are combined.

Reivindicaciones

1. 1. Un método para la identificación decompuestos que inducen estrés de retículo endoplásmico en unacélula que comprende las etapas de: 2. a) 3. i) 4. ii) 5. y 6. b) 7. en donde el compuesto ensayado es identificado comoinductor de dicho estrés si provoca una variación en la expresióndel gen reportero donde el cambio es un aumento de expresión encomparación con la alteración de la expresión en ausencia de dichocompuesto. 8. 2. Un método para la identificación decompuestos que inducen estrés oxidativo o estrés de retículoendoplasmático en una célula que comprende las etapas de: 9. a) 10. i) 11. ii) 12. y 13. b) 14. en donde el compuesto ensayado es identificado comoinductor de dicho estrés si provoca una variación en la expresióndel gen reportero donde el cambio es un aumento de expresión encomparación con la alteración de la expresión en ausencia de dichocompuesto. 15. 3. Un método para la identificación decompuestos que inhiben estrés de retículo endoplásmico en unacélula que comprende las etapas de: 16. a) 17. i) 18. ii) 19. b) 20. c) 21. en donde el compuesto ensayado es identificado comoinhibidor de dicho estrés si provoca una variación en la expresióndel gen reportero donde el cambio es una disminución de expresiónen comparación con la alteración de la expresión en ausencia dedicho compuesto. 22. 4. Un método según la reivindicación 3, en elque dicha variante es la identificada en la SEQ ID NO: 2. 23. 5. Método según cualquiera de lasreivindicaciones 3 a 4, donde dichas condiciones de estrés sealcanzan mediante la exposición de dicha célula a un inhibidor de laN-glicosilación de proteínas, a tapsigargina o a unabajada de temperatura. 24. 6. Método según la reivindicación 5, donde dichoinhibidor de la N-glicosilación de proteínas es latunicamicina. 25. 7. Un método para la identificación decompuestos que inhiben estrés oxidativo en una célula que comprendelas etapas de: 26. a) 27. i) 28. ii) 29. b) 30. c) 31. en donde el compuesto ensayado es identificado comoinhibidor de dicho estrés si provoca una variación en la expresióndel gen reportero donde el cambio es una disminución de expresiónen comparación con la alteración de la expresión en ausencia dedicho compuesto. 32. 8. Método según las reivindicación 7, dondedichas condiciones de estrés se alcanzan mediante la exposición dedicha célula a un inductor de la liberación de aniones superóxido ode radicales libres en la célula. 33. 9. Método según la reivindicación 8, donde dichoinductor es el sistema Xantina/Xantina-Oxidasa oagua oxigenada. 34. 10. Una construcción génica que comprende unasecuencia de ADN que comprende la secuencia de nucleótidosidentificada en la SEQ ID NO: 1 o una variante funcionalmenteequivalente de la misma. 35. 11. Construcción génica según la reivindicación10, donde dicha variante presenta el polimorfismo identificado enla SEQ ID NO: 2. 36. 12. Construcción génica según la reivindicación10 u 11, que comprende, adicionalmente, la secuencia de nucleótidosde un gen de interés operativamente unida. 37. 13. Un vector de expresión que comprende unaconstrucción génica según una cualquiera de las reivindicaciones 10a 12. 38. 14. Una célula que comprende una construccióngénica según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, o unvector de expresión según la reivindicación 13. 39. 15. Una célula que expresa una construccióngénica que comprende 40. a) 41. b) 42. 16. Célula según la reivindicación 15, dondedicha variante es la identificada en la SEQ ID NO: 2. 43. 17. Una célula según las reivindicaciones 14 a16 donde dicha célula es una célulaSK-N-MC. 44. 18. Método para la expresión regulada de un gende interés que comprende 45. a) 46. b) 47. c) 48. 19. Un método según la reivindicación 18, en elque dicha variante es la identificada en la SEQ ID NO: 2. 49. 20. Método según cualquiera de lasreivindicaciones 18 a 19, donde dichas condiciones de estrés sealcanzan mediante la exposición de dicha célula a un inhibidor de laN-glicosilación de proteínas. 50. 21. Método según la reivindicación 20, dondedicho inhibidor de la N-glicosilación de proteínases la tunicamicina. 51. 22. Método para la expresión regulada de un gende interés que comprende 52. a) 53. b) 54. c) 55. 23. Método según las reivindicación 22, dondedichas condiciones de estrés se alcanzan mediante la exposición dedicha célula a un inductor de la liberación de aniones superóxidoen la célula. 56. 24. Método según la reivindicación 23, dondedicho inductor es el sistemaXantina/Xantina-Oxidasa. 57. 25. Un animal no-humanotransgénico que contiene, insertado en su genoma, una construccióngénica según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12.

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