Resumen
Method for selective in vitro expansion and acquisition of tissue-resident phenotype of {IMAGEN-01} cells derived from peripheral blood. The invention relates to a method for selectively expanding {IMAGEN-02} cells from a peripheral blood sample in vitro and providing them with a tissue-resident phenotype. The invention also relates to cellular compositions obtained by this method and their use in the treatment of solid cancers. The method includes: a) isolating total {IMAGEN-03} cells from a blood sample; b) culturing them in a cocktail containing: IL-2, IL-15 and TGFβ; c) removing them from the cocktail in step b) and culturing them with: IL-2, IL-15 and anti-CD3 antibodies. The invention also includes a kit consisting of two base culture media and an anti-CD3 antibody, the culture media being complemented, one with IL-2, IL-15 and TGFβ, the other with IL-2 and IL-15. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Reivindicaciones
1. REIVINDICACIONES 1. Método de expansión selectivain vitroy adquisición de fenotipo residente en tejido de células γS V51+ procedentes de sangre periférica que incluye los siguientes pasos: a) aislar células T γS totales de una muestra de sangre periférica; b) cultivar las células del paso a) durante 7/9 días en un medio de cultivo adecuado con un cóctel que contiene: IL-2, IL-15, TGFP; c) retirar las células del medio de cultivo del paso b) y cultivarlas hasta completar 20/22 días de cultivo en un medio de cultivo que contiene: IL-2, IL-15, anticuerpos anti-CD3. 2. Método según la reivindicación 1 en el que el cóctel del paso b) incluye 100 U/mL de IL-2, 20 ng/mL de IL-15 y entre 2,5 y 250 ng/mL de TGF-p. 3. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la concentración de TGFp del paso b) es de 25 ng/mL. 4. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el medio de cultivo del paso c) contiene 100 U/mL de IL-2, 20 ng/mL de IL-15 y entre 0,1 ^g/mL y 10 ^g/mL de anticuerpo anti-CD3. 5. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la concentración de anticuerpo anti-CD3 del paso c) es de 1^g/mL. 6. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la sangre periférica de la muestra es humana. 7. Composición celular obtenida u obtenible mediante el método descrito en cualquiera de las reivindicaciones anteriores que incluye, al menos, un 60% de células T γS V51+. 8. Composición celular según la reivindicación 7 en la que el porcentaje de células T Y5 V51+ es de, al menos, el 90%. 9. Composición celular según cualquiera de las reivindicaciones 7-8 en la que las células γ5 V51+ procedentes de sangre periférica se caracterizan por presentar la firma de residencia tisular (TRS): CD103, CD101, CD49a, CLA y CXCR4. 10. Kit de cultivo celular para la expansiónin vitrode células T γS V51+ procedentes de sangre periférica que consiste en: - un primer medio de cultivo basal, IL-2, IL-15 y TGFP; - un segundo medio de cultivo basal, IL-2, IL-15, - un anticuerpo anti-CD3, - aditivos y/o antibióticos adecuados. 11. Kit de cultivo celular según la reivindicación 10 en el que las concentraciones en el primer medio de cultivo basal son: - 100 U/mL IL-2, -20 ng/mL IL-15, - entre 2,5 y 250 ng/mL TGF-p, en el segundo medio de cultivo basal son. - 100 U/mL IL-2, -20 ng/mL IL-15, y la concentración del anticuerpo anti-CD3 es de entre 0,1 ^g/mL y 10 ^g/mL. 12. Kit de cultivo celular según cualquiera de las reivindicaciones 10-11 en el que la concentración de TGFp es de 25 ng/mL. 13. Kit de cultivo celular según cualquiera de las reivindicaciones 10-12 en el que la concentración de anticuerpo anti-CD3 es de 1 ^g/mL. 14. Composición farmacéutica que comprende una composición celular según cualquiera de las reivindicaciones 7-9 y un excipiente farmacéuticamente aceptable. 15. Composición celular según cualquiera de las reivindicaciones 7-9 para su uso como medicamento. 16. Composición celular según cualquiera de las reivindicaciones 7-9 para su uso en el tratamiento de cánceres sólidos.
