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Resumen

PCR detection method of Legionella pneumophila bacteria in environmental and/or clinical samples The present invention relates to a method for detecting Legionella pneumophila bacteria in environmental and/or clinical samples, preferably in air, by the polymerase chain reaction (PCR) technique without the need for prior culture. It is based on the detection of a specific region of the 16S rRNA gene of the bacterium, specifically in the section between the hypervariable regions V3 and V5, through the use of a pair of primers, of which the one that binds specifically to the V5 region has been designed for the first time in this invention. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Reivindicaciones

1. REIVINDICACIONES 1. Un método de detección deen una muestra, sin cultivo previo de dicha muestra, que comprende: 5 - llevar a cabo una primera Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) sobre la muestra, utilizando un par de cebadores que amplifican una región del gen 16S rRNA bacteriano; y - llevar a cabo una segunda PCR anidada, utilizando un par de cebadores específicos de la especieque se unen a una región del 10 gen 16S rRNA amplificada en la primera PCR, donde uno de los dos cebadores comprende al menos la siguiente secuencia: CCACTAATTATTTTCATATAACCAAC (SEQ ID No. 1), o una secuencia homóloga que difiera en no más de 5 sustituciones de nucleótidos. 15 2. El método de la reivindicación anterior, donde la muestra es ambiental y/o clínica. 3. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde la muestra es una muestra de aire. 20 4. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el par de cebadores de la primera PCR presentan las siguientes secuencias: o TGGAGATTTGATCCTGGCTCAG (SEQ ID No. 2), o una secuencia homóloga; y o CCGTCAATTCCTTTGAGTTT (SEQ ID No.3), o una secuencia homóloga. 25 5. El método según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el par de cebadores que se utiliza en la segunda PCR comprenden al menos las siguientes secuencias: o CCACT AATT ATTTT CATAT AACCAAC (SEQ ID No. 1), o una secuencia 30 homóloga que difiera en no más de 5 sustituciones de nucleótidos; y o GGGTT GAT AGGTT AAGAGCTGATT AAC (SEQ ID No. 4), o una secuencia homóloga que difiera en no más de 5 sustituciones de nucleótidos. 35 6. Un cebador para PCR que comprende la siguiente secuencia nucleotídica: CCACTAATTATTTTCATATAACCAAC (SEQ ID No. 1), o una secuencia homologa que difiera en no más de 5 sustituciones de nucleótidos. 7. Uso del cebador descrito en una cualquiera de las reivindicaciones 5 ó 6 en una PCR 5 para la detección de una bacteria patógena, que es 8. El uso de la reivindicación anterior, donde la PCR es una segunda PCR anidada en un método de detección que comprende dos PCR de amplificación del gen 16S rRNA bacteriano. 10 9. Un kit para la detección de una bacteria patógena que comprende una pluralidad de cebadores para PCR, siendo uno de estos cebadores un cebador que comprende al menos la siguiente secuencia: CCACT AATT ATTTT CATAT AACCAAC (SEQ ID No. 1), o una secuencia 15 homóloga que difiera en no más de 5 sustituciones de nucleótidos.

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