Resumen
Enzyme and procedure for obtaining nucleotides in a single step by means of a bifunctional biocatalyst. A bifunctional enzyme is disclosed, capable of acting either as a hypoxanthineguanine phosphoribosyltransferase or as an AMP kinase, depending on the substrates with which it is confronted. Also disclosed are nucleic acids encoding said enzyme, methods for obtaining said enzyme, uses of said enzyme and methods for obtaining nucleotides by using said enzyme. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Reivindicaciones
1. REIVINDICACIONES 1. Enzima caracterizada porque comprende los dominios HPGRT y AMPK. 2. Enzima según la reivindicación 1, caracterizada porque los dominios HPGRT y AMPK son los dominios HPGRT y AMPK deZobellia galactanivorans. 3. Enzima según la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque comprende en su secuencia la secuencia SEQ ID NO: 1. 4. Enzima según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque consiste de la secuencia SEQ ID NO: 1. 5. Procedimiento para la obtención de nucleótidos caracterizado porque comprende una etapa de poner en contacto una enzima según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 con al menos un sustrato adecuado. 6. Procedimiento según la reivindicación 5, caracterizado porque el procedimiento es un procedimiento para la obtención de nucleósidos-5’-monofosfato y porque el al menos un sustrato adecuado es una nucleobase y un donador de grupo 5-fosforribosa. 7. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque la nucleobase es una base nitrogenada 6-oxopurínica. 8. Procedimiento según la reivindicación 6 ó 7, caracterizado porque la nucleobase es guanina o hipoxantina. 9. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, caracterizado porque el donador de grupo 5-fosforribosa es 5-fosfo-a-D-ribosil-1-pirofosfato. 10. Procedimiento según la reivindicación 5, caracterizado porque el al menos un sustrato es AMP, ADP, ATP o combinaciones de los mismos. 11. Procedimiento según la reivindicación 10, caracterizado porque el procedimiento es para la obtención de ADP y porque el al menos un sustrato es AMP y ATP. 12. Procedimiento según la reivindicación 11, caracterizado porque el procedimiento es para la obtención de AMP y ATP y porque el al menos un sustrato es ADP. 13. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 12, caracterizado porque en la etapa de poner en contacto una enzima según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 con al menos un sustrato la temperatura es de entre 40 °C y 80 °C. 14. Procedimiento según la reivindicación 13, caracterizado porque la temperatura es entre 40 °C y 60 °C. 15. Procedimiento según la reivindicación 13 ó 14, caracterizado porque la temperatura es 60 °C. 16. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 13 ó 14, caracterizado porque la temperatura es 40°C. 17. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 16, caracterizado porque en la etapa de poner en contacto una enzima según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 con al menos un sustrato el pH es de entre 5,5 y 8. 18. Procedimiento según la reivindicación 17, caracterizado porque el pH es de entre 6 y 7. 19. Procedimiento según la reivindicación 17 ó 18, caracterizado porque el pH es 7. 20. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 19, caracterizado porque la etapa de poner en contacto una enzima según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 con al menos un sustrato se lleva a cabo en una solución tampón. 21. Procedimiento según la reivindicación 20, caracterizado porque la solución tampón es tampón fosfato. 22. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 21, caracterizado porque el procedimiento se lleve a cabo en presencia de al menos un disolvente orgánico. 23. Procedimiento según la reivindicación 22, caracterizado porque el al menos un disolvente orgánico se selecciona de entre disolventes orgánicos polares apróticos, alcoholes, polioles o combinaciones de los mismos. 24. Procedimiento según la reivindicación 22 ó 23, caracterizado porque el almenos un disolvente orgánico se selecciona entre acetona, acetato de etilo, acetonitrilo, cloroformo, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), etanol, isopropanol, metanol, glicerol, etilenglicol, propilenglicol o combinaciones de los mismos. 25. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 22 a 24, caracterizado porque la concentración del al menos un disolvente orgánico es del 20% (v/v) o inferior. 26. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 25, caracterizado porque en la etapa de poner en contacto una enzima según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 con al menos un sustrato se utiliza al menos un cofactor. 27. Procedimiento según la reivindicación 26, caracterizado porque el al menos un cofactor es al menos un catión divalente. 28. Procedimiento según la reivindicación 27, caracterizado porque el al menos un catión divalente es Mg2+, Co2+ o combinaciones de los mismos. 29. Procedimiento según la reivindicación 27 ó 28, caracterizado porque el al menos un catión divalente es Mg2+. 30. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 27 a 29, caracterizado porque la concentración del al menos un catión divalente es de entre 2 mM y 20 mM. 31. Procedimiento según la reivindicación 30, caracterizado porque la concentración del al menos un catión divalente es de entre 2 mM y 3 mM . 32. Uso de una enzima según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para la obtención de nucleótidos. 33. Ácido nucleico caracterizado porque codifica para una enzima según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4. 34. Ácido nucleico según la reivindicación 33, caracterizado porque comprende la secuencia SEQ ID NO: 2. 35. Procedimiento para la obtención de una enzima según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
