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Resumen

In vitro method to recover the expression of the F5 gene encoding coagulation factor V. The present invention is related to the deficiency of factor V of coagulation and to gene editing (CRISPR), for the in vitro correction of mutations in the F5 gene and the generation of tools with which to cure the disease that today does not have treatment. The invention includes an in vitro method to recover the expression of the F5 gene encoding coagulation factor V, by using the CRISPR/Cas9 methodology that corrects the new pathological mutation described. The invention also includes in vitro cell cultures in which the new mutation has been corrected, as well as kits that include the pairs of guides used in the CRISPR/Cas9 method to recover the expression of the F5 gene with that mutation. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Reivindicaciones

1. R E I V I N D I C A C I O N E S 1. Métodoin vitropara recuperar la expresión del genF5que codifica el factor V de la coagulación mediante la utilización de la metodología CRISPR/Cas9 que incluye la utilización de una pareja de guías en la que cada una de las guías tiene una longitud de entre 18 y 22 nucleótidos y ambas están localizadas entre 150 nucleótidos corriente arriba y 150 nucleótidos corriente abajo con respecto a la posición de una mutación localizada en el nucleótido 3279 del genF5. 2. Métodoin vitrosegún la reivindicación 1 en el que el genF5mutado está caracterizado por SEQ ID NO: 65. 3. Métodoin vitrosegún cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la pareja de guías utilizada es la pareja de guías caracterizadas por SEQ ID NO: 68-69 o la pareja de guías caracterizadas por SEQ ID NO: 70-71. 4. Cultivo celularin vitroen el que se ha recuperado la expresión del genF5que codifica el factor V de la coagulación mediante la utilización de la metodología CRISPR/Cas9 incluyendo la utilización de una pareja de guías en la que cada una de las guías tiene una longitud de entre 18 y 22 nucleótidos y ambas están localizadas entre 150 nucleótidos corriente arriba y 150 nucleótidos corriente abajo con respecto a la posición de una mutación localizada en el nucleótido 3279 del genF5. 5. Cultivo celularin vitrosegún la reivindicación 4 en el que el genF5con una mutación en el nucleótido 3279 está caracterizado por SEQ ID NO: 65. 6. Cultivo celularin vitrosegún cualquiera de las reivindicaciones 4-5 en el que la pareja de guías utilizada es la pareja de guías caracterizadas por SEQ ID NO:68-69 o la pareja de guías caracterizadas por SEQ ID NO: 70-71. 7. Kit que comprende una pareja de guías en la que cada una de las guías tiene una longitud de entre 18 y 22 nucleótidos y ambas están localizadas entre 150 nucleótidos corriente arriba y 150 nucleótidos corriente abajo con respecto a la posición de una mutación localizada en el nucleótido 3279 del genF5. 8. Kit según la reivindicación 7 en el que el genF5con una mutación en el nucleótido 3279 está caracterizado por SEQ ID NO: 65. 9. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 7-8 que comprende la pareja de guías caracterizadas por SEQ ID NO: 68-69 y/o la pareja de guías caracterizadas por SEQ ID NO: 70-71. 10. Kit según cualquiera de las re ivindicaciones 7-9 que com prende, además, una proteína Cas9.

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