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Resumen

Fluorometric method for the direct titration of nitrites/nitrates in serum and in biological tissue extracts. The titration of nitrites and nitrates is in increasing demand in both basic and clinical research laboratories. Some commercial fluorometric kits have the great drawback that they must be previously processed to eliminate interferences. The present invention describes a method for the titration of nitrites/nitrates for a concentration range of 0 to 1200 pmol of biological samples in a simple, direct way and avoiding the previous treatment of sample preparation to eliminate possible molecules that interfere in the result in other methods. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Reivindicaciones

1. REIVINDICACIONES 1. Método fluorimétrico para la valoración directa de nitritos/nitratos en suero y en extractos de tejidos biológicos, caracterizado porque no requiere tratamiento previo para eliminar proteínas o metabolitos y que comprende las siguientes etapas: a) Preparar una disolución de 1mg/ml de 2,3-daminonaftaleno (DAN) en HCl 0,6M y conservar en congelador. b) En el momento de cada valoración, preparar una disolución tomando 10 pl de de la disolución anterior (DAN concentrado) y 190 pl de HCl 0,6M. c) Obtener una curva de calibración de concentración de nitritos en un rango de 0 a 500 pmoles. d) Tomar un volumen entre 5 y 30 pl de suero o extracto de muestra biológica e) Añadir agua destilada hasta un volumen total de 150 pl f) Adicionar 10 pl de DAN diluido y mantener la mezcla 15 minutos a temperatura ambiente y en la oscuridad para permitir que se produzca la reacción entre los nitritos y el DAN. g) Adicionar 50 pl de NaOH 3M y mantener, de nuevo, la mezcla 15 minutos en la oscuridad. h) Leer la fluorescencia a 340 nm exc y 460 nm en en un fluorímetro. i) Determinar la concentración de nitritos a partir de la fluorescencia leída y la curva de calibración de nitritos. j) Convertir los nitratos en nitritos y repetir las dos etapas anteriores para obtener la concentración de nitritos más los nitratos. k) Determinar la concentración de nitratos restando el valor de los nitritos. 2. Método fluorimétrico para la valoración directa de nitritos/nitratos, según reivindicación 1, donde la concentración de nitritos/nitratos en la muestra de suero o extracto biológico está comprendida en el intervalo de 0 a 1200 pmoles. 3. Método fluorimétrico para la valoración directa de nitritos/nitratos, según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, donde el volumen de la muestra de suero o extracto de muestra biológica está comprendido entre 5 y 30 pl. 4. Método fluorimétrico para la valoración directa de nitritos/nitratos, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde el extracto biológico procede de tejidos de hígado, vejiga o células endoteliales y polimorfonucleares.

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