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PRODUCTION OF PICHIA PASTORIS YEAST AND SYSTEM FOR PURIFYING THE RECOMBINANT ALLERGEN OF OLEA EUROPAEA OLE E 1 FOR UTILIZATION IN THE DIAGNOSIS AND TREATMENT OF ALLERGIESCM Patents

Índice de la ficha

Updated at
24/07/2026
Numero publicacion
WO.0212503.A1
Fecha publicacion
14/02/2002
Numero solicitud
WO2001ES00287
Fecha presentacion
19/07/2001

En detalle

Resumen

The invention relates to the production of Pichia pastoris yeast and a system for purifying the recombinant allergen of Olea europaea Ole e 1 for utilization in the diagnosis and treatment of allergies. The recombinant DNA coding for allergens Ole e 1 of olive tree pollen (Olea europaea), Syr v 1 from lilac pollen (Syringa vulgaris) and Lig v 1 of privet (Ligustrum vulgare) has been cloned and expressed. Said allergens have great structural similarity amongst them and with other pollen allergens of other Oleaceae. Recombinant proteins produced in the Pichia pastoris yeast are isolated with high yields, are correctly folded and exhibit immunological properties equivalent to those of natural allergens. Hence, they can be used in diagnosis protocol and immunotherapy.The invention relates to the production in Pichia pastoris yeast and a system for purifying the recombinant allergen of Olea europaea Ole e 1 for utilization in the diagnosis and treatment of allergies. The recombinant DNA coding for allergens Ole e 1 of olive tree pollen ( Olea europaea ), Syr v 1 from lilac pollen ( Syringa vulgaris ) and Lig v 1 of privet ( Ligustrum vulgare ) has been cloned and expressed. Such allergens have great structural similarity amongst them and with other pollen allergens of other Oleaceae. Recombinant proteins produced in the Pichia pastoris yeast are isolated with high yields, are correctly folded and exhibit immunological properties equivalent to those of natural allergens. Hence, they can be used in diagnosis protocol and immunotherapy.

Reivindicaciones

1. 1. Moléculas de DNA recombinantecaracterizadas por SEQ ID NO 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 que codificanpolipéptidos con actividad alergénica que poseen al menos unepítopo alergénico común con el alergeno principal de Oleaeuropaea. 2. 2. Moléculas de DNA recombinante, segúnreivindicación 1, o modificaciones de las mismas, que codificanpolipéptidos con, al menos, un epítopo de Ole e 1 en su estructura, unido a un polipéptido adicional, o modificado química oenzimáticamente. 3. 3. Moléculas de DNA recombinantecaracterizadas por presentar, al menos, un 60% de identidadcon las descritas en SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3, SEQ ID NO4, SEQ ID NO 5, SEQ ID NO 6, SEQ Id NO 7 y SEQ ID NO 8, conteniendouna secuencia de nucleotidos que codifica un polipéptido conactividad alergénica idéntica o reducida (hipoalergénica) conrespecto a Ole e 1. 4. 4. Polipéptidos recombinantes del alergeno Ole e1 de Olea europaea, o fragmentos de dichos polipéptidos, según reivindicación 1, caracterizados por las secuenciasdadas en SEQ ID NO 9, 10, 11, que presentan la antigenicidad de, almenos, un epítopo de Ole e 1. 5. 5. Polipéptidos recombinantes del alergenoprincipal de Syringa vulgaris, o fragmentos de dichospolipéptidos, según reivindicación 1, caracterizados porlas secuencias dadas en SEQ ID NO 12, 13, 14 que presentan laantigenicidad de, al menos, un epítopo de Ole e 1. 6. 6.Polipéptidos recombinantes del alergenoprincipal de Ligustrum vulgare, o fragmentos de dichospolipéptidos, según reivindicación 1, caracterizados por lassecuencias dadas en SEQ ID NO 15 y 16 que presentan laantigenicidad de, al menos, un epítopo de Ole e 1. 7. 7. Polipéptidos o fragmentos de dichospolipéptidos de polen de Olea europaea, Syringa vulgaris yLigustrum vulgare con, al menos, un epítopo de Ole e 1 segúnreivindicaciones anteriores, que se produzcan recombinantes unidosa un polipéptido adicional. 8. 8. Polipéptidos de polen de Olea europaea, Syringa vulgaris y Ligustrum vulgare, según reivindicacionesanteriores, que estén modificados química o enzimáticamente. 9. 9. Un vector de expresión eucariota, ypreferentemente pPIC9, que contenga las secuencias de nucleotidosmencionadas en las reivindicaciones anteriores y que permita suproducción recombinante. 10. 10. Un organismo hospedador eucariota, transformado con la construcción formada por el vector de expresiónpPIC9 y las secuencias de DNA (SEQ N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8) de lasreivindicaciones 1, 2 y 3, que sirvan para producir los polipéptidosindicados en las reivindicaciones 4, 5, 6 y 7. 11. 11. Un método para producir las formasrecombinantes correspondientes a las secuencias polipeptídicasmencionadas en la reivindicaciones 4, 5, 6 y 7, en el sistemaeucariótico de levadura Pichia pastoris y preferentemente dela cepa GS15, caracterizado por una cromatografía deintercambio iónico en DEAE-celulosa y una defiltración en gel en Sephadex G-75. 12. 12. Utilización de las moléculas segúnreivindicaciones 1-9 en el diagnóstico ``invitro'' de la alergia. 13. 13. Aplicación de las moléculas recombinantes delas reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6, y 7 para el diseño devacunas destinadas a la inmunoterapia de la alergia. 14. 14. Aplicación de las moléculas recombinantes delas reivindicaciones 4-7 para producir péptidos quecontengan al menos un epítopo T capaces de actuar como vacunas. 15. 15. Aplicación de las moléculas recombinantes delas reivindicaciones 4-7 para la producción deisoformas recombinantes hipoalergénicas que tengan disminuida oanulada su unión a IgE para el tratamiento de alergias.

Etiquetas

Inventores
Rodriguez Garcia RosaliaVillalba Diaz M TeresaMonsalve Clemente RafaeliBataner Cremades EvaVillalba Diaz Maria TeresaMonsalve Clemente RafaelBatanero Cremades Eva
Solicitantes
Universidad Complutense de MadridRodriguez Garcia RosaliaVillalba Diaz Maria TeresaMonsalve Clemente RafaelBatanero Cremades Eva
Clasificacion ipc
A61K 39/ 35 A IA61P 37/ 08 A IC12N 15/ 29 A IC12N 15/ 81 A I
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