Resumen
The invention relates to the molecular mechanism for the activation of the T cells which takes place in inflammatory or immune reactions following activation from the binding of antigen/MHC to the TCR antigen receptor, demonstrating the key role of the specific interaction between determined domains of proteins CD3 epsilon and Nck in modulating the transmission of signals which occurs during said cell activation. Moreover, the invention relates to methods of modulating T cell activation using methods that allow the CD3 epsilon and Nck protein-protein interaction to be altered.
Reivindicaciones
REIVINDICACIONES 1.-Procedimiento modulador de la activacion de los linfocitos T caracterizado porque se basa en la regulación de la interacción proteina-proteina de CD3F,-Nck. 2. -Procedimiento modulador de la activación de los linfocitos T begun la reivindicación 1 caracterizado porque se usan sustancias quimicas que alteran dicha interacción mediante su inhibition (antagonistas). 3. -Procedimiento modulador de la activación de los linfocitos T begun la reivindicación 1 caracterizado porque se usan sustancias quimicas que alteran dicha interacción mediante su activation (agonistas). 4. -Procedimiento modulador de la activation de los linfocitos T begun una cualquiera de las reivindicaciones 2 y 3 caracterizado porque dichas sustancias agonistas o antagonistas se identifican con un método que comprende los siguientes pasos: a) generar una preparación biologica de la interacción proteina-proteina que mimetize la interacción CD3#-Nck, b) anadir la sustancia quimica candidata a agonista 6 antagonista, y c) determinar el bloqueo o activación de la interaccion proteina-proteina CD3e-Nck, identificandose en caso de bloqueo un antagonista de la interacción CD3s-Nck y en caso de activation un agonista de la interacción CD3-Nck. 5. -Procedimiento modulador de la activación de los linfocitos T begun la reivindicación 4 caracterizado porque la preparción biologica de la interaccion proteina-proteina de CD3- Nck se realiza utilizando las proteins CD3 y Nck humanas, sus formas homologuas o peptids (fragmentos) que mimetizan la actividad biológica de dichas proteins o sus formas homologas. 6. -Procedimiento modulador de la activación de los linfocitos T begun la reivindicación 4 6 5 caracterizado porque el peptido que mimetiza la actividad biológica de NcK de union a CD3 comprende la secuencia de aminoácidos del dominio SH3.1 de NcKp (SEQ ID N02). 7. -Procedimiento modulador de la activación de los linfocitos T begun la reivindicación 4 6 5 caracterizado porque el peptido que mimetiza la actividad biológica de NcK de union a CD3 comprende la secuencia de aminoácidos del dominio SH3.1 de NcKa (SEQ ID N03). <Desc/Clms Page number 33> 8.-Procedimiento modulador de la activation de los linfocitos T segun la reivindicación 4 6 5 caracterizado porque ex peptid que mimetiza la actividad biológica de CD3 de union a Nck comprende la secuencia de aminoácidos de a region rica de prolinas (PRS) de CD3 (SEQ ID NO1). 9. -Procedimiento modulador de la activation de los linfocitos T begun una cualquiera de las reivindicaciones 4 a la 8 caracterizado porque la secuencia de aminoácidos de las proteins CD3 y Nck humanas, sus formas homologuas o peptids (fragmentos) que mimetizan la actividad biológica de dichas proteins o sus formas homologuas esta contenida en una proteina de fusion. 10. -Procedimiento modulador de la activation de los linfocitos T begun la reivindicación 9 caracterizado porque la proteina de fusion es, entre otras, GST-SH3.1, SH3.1-EGFP, Nck- EGFP y HA-Nck. 11. 11.- Procedimiento modulador de la activaci6n de los linfocitos T begun una cualquiera de las reivindicaciones 4 a la 10 caracterizado porque las proteins CD3 y Nck humanas, sus formas homologuas o peptids (fragmentos) que mimetizan la actividad biológica de dichas proteins o sus formas homologuas provienen de lisados celulares o a partir de preparaciones de proteins purificadas o semipurificadas. 12.-Procedimiento modulador de la activation de los linfocitos T begun una cualquiera de las reivindicaciones 4 a la 11 caracterizado porque la preparación biológica de la interacción proteina-proteina de CD3s-Nck se realiza en un entorno libre de celulas. 13. -Procedimiento modulador de la activación de los linfocitos T la reivindicación 12 caracterizado porque el entorno libre de células es, entre otras posibilidades, un ensayo de inmunoprecipitación y un ensayo de estimulación del TCR purificado. 14. -Procedimiento modulador de la actiación de los linfocitos T begun una cualquiera de las reivindicaciones 4 a la 13 caracterizado porque los complejos proteina-proteina que mimetizan la interacción CD3E-Nck son identificados, entre otras posibilidades, por técnicas inmunologicas. 15. -Procedimiento modulador de la activación de los linfocitos T segun una cualquiera de las reivindicaciones 4 a la 11 caracterizado porque la prepación biológica de la interacción proteina-proteina de CD3s-Nck se realiza en un entorno celular, entre otras posibilidades, un ensayo funcional de cuantificacion de extension y despliegue celular, un ensayo funcional de cuantificacion de secretion de citoquinas (IL-2 y TNFα), un ensayo funcional <Desc/Clms Page number 34> de cuantificacion de la proliferación celular, un ensayo fucional de cuantificacion de la formación de conjugados entre linfocitos T y células APC, un ensayo funcional de cuantificacion de la maduración de la IS y un ensayo de dos hibridos (trap assay). 16. -Procedimiento modulador de la activation de los linfocitos T begun una cualquiera de las reivindicaciones 4 a la 15 caracterizado porque la preparacion biologica de la interacción proteina-proteina de CD3s-Nck y la determinación del bloqueo o activation de dicha interacción tras la adición de un candidato agonista o antagonista se realiza en una situación basal o de control, de estimulación (anti-CD3 y células APC cargadas con superantigeno 6 antigeno, entre otros) o de bloqueo (sobreexpresión de SH3.1 de Nck y transducción del anticuerpo APA1/1, entre otros) de dicha interaccion segun el interns en identificar uno u otro agente. 17. -Procedimiento modulador de la activation de los linfocitos T begun una cualquiera de las reivindicaciones 2 a la 16 caracterizado porque las sustancias quimicas candidatas a ser probadas como moduladores de la interacción CD3s-Nek pueden ser producidos, por ejemplo, por bacterias, levaduras y otros microorganismos (productos naturales), producidos quimicamente (por ejemplo, moléculas de pequeno tama o incluyendo peptidomiméticos), o producidos por ingenieria genetic. 18. -Procedimiento modulador de la activation de los linfocitos T begun la reïvindicación 1 caracterizado porque consiste en un tratamiento de terapia genica que permite la regulation de la interacción proteina-proteina de CD3 y Nck. 19. -Procedimiento modulador de la activation de los linfocitos T begun la reivindicación 18 caracterizado porque la regulation es un bloqueo de la interacción CD3e-Nck que se realiza, entre otras posibilidades, mediante la sobreexpresión del dominio SH3.1 de Nck o por transducción con un anticuerpo especifico (APA1/1). 20. -Procedimiento modulador de la activación de los linfocitos T begun una cualquiera de las reivindicaciones 1-2 y de la 4 a la 19 caracterizado porque forma parte de un protocolo de tratamiento enfermedades que cursan con una activación patológica de los linfocitos T como son, entre otras, enfermedades autoinmunes como la artritis reumatoide, lupus eritematoso, esclerosis multiple, diabetes tipo I y miastenia gravis; enfermedades de tipo alergico ; en la prevencion y en el tratamiento del rechazo de transplantes y linfomas de linfocitos T. <Desc/Clms Page number 35> 21.-Procedimiento modulador de la activation de los linfocitos T begun una cualquiera de las reivindicaciones 1 y de la 3 a la 18 caracterizado porque forma parte de un protocolo de tratamiento de enfermedades que cursan con una inhibition de los linfocitos T como son, entre otras, enfermedades infecciosas, bacterianas y virales entre otras, y tumorales. 22. -Secuencia de nucleótidos (DNA, RNA o cDNA) codificantes de proteins CD3 y Nck humanas, sus formas homologuas o peptids (fragmentos) que mimetizan la actividad biologica de dichas proteins o sus formas homologuas caracterizada porque forma parte de un procedimiento begun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 21. 23. -Vector de expresión caracterizado porque contiene una secuencia de nucleótidos segun la reivindicación 22. 24.-Celula huésped caracterizada porque contiene un vector de expression segun la reivindicación 23.
