Resumen
Measuring the half-life of fluorescence emission in the frequency domain is made difficult by the presence of background signals. A method and apparatus are proposed for detecting said lifetime even when the fluorescence is much lower than the background, without the need for a calibration sample, based on successive exploration of states in the system. The feature of these states is that the background signal is constant, whereas the signal of interest changes. The signal of interest may be recovered by cancelling the common signal. This method may be used to eliminate the effect of light dispersed by excitation, autofluorescence and electromagnetic interference.
Reivindicaciones
1. 1. Método de medida del patrón de decaimientotemporal de la intensidad fluorescente en el dominio de lafrecuencia, caracterizado por los siguientes pasos: 2. 2. Método según reivindicación 1, caracterizado por que al variar la frecuencia de modulación, alguna (s) de las características de la señal de fondovaría (n) de una forma que se conoce por la realización de unamedida de calibración en condiciones conocidas previa a la medida deinterés, y que la información de esta medida de calibración previase usa para realizar una corrección de la señal medida, para luegorealizar la cancelación de la señal común entre distintasfrecuencias de medida. 3. 3. Método según reivindicación 1, caracterizado por que al variar la frecuencia de modulación, alguna (s) de las características de la señal de fondovaría (n) de una forma que se conoce por la obtención duranteel propio experimento de una señal y que sirva para calibrar dichavariación y que esta señal X se caracteriza por que la relaciónentre la señal de fondo debida a la excitación y la de fluorescenciaes mayor que dicha relación en la señal Y de medida de lafluorescencia, realizándose posteriormente una corrección de laseñal Y con el patrón de calibración X, procediendo a la cancelaciónde la señal común entre las distintas frecuencias de medida. 4. 4. Método según reivindicación 3, caracterizado por que las señales X (de calibración) e Y (demedida) se obtienen de dos fotodetectores distintos. 5. 5. Método según reivindicación 3, caracterizado por que las señales X (de calibración) e Y (demedida) proceden del mismo fotodetector, y se corresponden con dosestados distintos del sistema en que la relación entre señal defondo debida a la excitación y la señal de fluorescencia es mayorpara el estado correspondiente a la señal X que para elcorrespondiente a la señal Y. 6. 6. Método según reivindicaciones 1, 2, 3, 4 ó 5, caracterizado por que la información de interés se obtieneúnicamente a partir de la parte real del fasor de medida. 7. 7. Método según reivindicaciones 1, 2, 3, 4 ó 5, caracterizado por que la información de interés se obtieneúnicamente a partir del módulo del fasor de medida. 8. 8. Sistema de medida del patrón de decaimientotemporal medida que implementa el método descrito en lareivindicación 1, caracterizado por que posee: 9. 9. Sistema según reivindicación 8, caracterizado por que realiza una calibración de la señalmedida con una señal de calibración adquirida previamente a larealización del experimento de interés, tal y como se describe en lareivindicación 2. 10. 10. Sistema según reivindicación 8, caracterizado por que realiza una calibración de la señalmedida Y con una señal de calibración X adquirida durante el propioexperimento de interés, siendo en la señal X mayor la relación de laseñal de fondo debida a la excitación y la señal de fluorescenciaque en la señal Y, tal y como se describe en la reivindicación3. 11. 11. Sistema según reivindicación 10, caracterizado por que posee al menos dos fotodetectoresdistintos, de tal modo que de uno de ellos se obtiene la señal decalibración X y del otro fotodetector se obtiene la señal de medidaY. 12. 12. Sistema según reivindicación 10, caracterizado por que las señales de calibración X y demedida Y se proceden del mismo fotodetector y se obtienen en dosestados distintos del sistema, que se caracterizan porque larelación entre la señal de fondo debida a la excitación y la señalde fluorescencia es mayor en la señal de calibración X que en la demedida Y, lo que se consigue variando entre estados distintos lacaracterística de transmisión óptica de al menos un elementomodulador, de tal manera que bloquee o deje pasar parte de la luzque incide sobre el fotodetector. 13. 13. Sistema según reivindicación 12, caracterizado por que el (los) elementos moduladorescuya transmisión óptica se hace variar consiste (n) enlámina (s) de cristal líquido (LCD) . 14. 14. Sistema según reivindicación 8, caracterizado por que el (los) elementos moduladorescuya transmisión óptica se hace variar para obtener dos señales, unade señal, y una de caracterización de la interferenciaelectromagnética, consiste (n) en lámina (s) de cristallíquido (LCD) .
