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Resumen

Method of measuring ex vivo vascular tone and flow chamber. The present invention relates to a method of measuring ex vivo vascular tone comprising: perfusing a constant flow of a cell suspension in an open circuit including a vessel whose tone is to be studied, closing the circuit, perfusing a krebs nutrient solution in the closed circuit and apply a constant transmural pressure, add a vasoactive substance and record the variations in diameter of the vessel by means of an image capture system located perpendicular to the vessel and coupled to a microscope. The invention also relates to a flow chamber in which to perform the method of measuring vascular tone that includes two glass capillaries, a bath, an infusion pump, a hydrostatic pressure system, a manometer, a thermoregulation system of the temperature of the bath and of the solutions and/or suspensions used, a system for capturing images and a microscope. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Reivindicaciones

1. 1. Método para la medición del tono vascular ex vivo que incluye: 2. a) perfundir un flujo constante de una suspensión celular en un circuito abierto que comprende el vaso cuyo tono se desea estudiar; 3. b) cambiar el circuito abierto (paso a) a circuito cerrado; 4. c) perfundir una solución nutricia de Krebs en el circuito cerrado y aplicar una presión transmural constante; 5. d) añadir la sustancia vasoactiva bajo estudio 6. e) registrar las variaciones de diámetro del vaso mediante un sistema de captación de imágenes situado perpendicularmente al vaso y acoplado a un microscopio. 7. 2. Método según la reivindicación 1 en el que la suspensión celular contiene células seleccionadas del siguiente grupo: células progenitoras endoteliales, leucocitos, plaquetas, hematíes y/o células cuyo efecto sobre el tono vascular se desee evaluar. 8. 3. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-2 en el que la suspensión celular contiene entre 10 y 1010 células/mi de medio. 9. 4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-3 en el que la presión transmural constante del paso c) es de 40 mmHg para vasos con diámetro menor a 1200 pm y de 60 mmHg para vasos con un diámetro igual o superior a 1200 pm. 10. 5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4 en el que la sustancia vasoactiva del paso d) es noradrenalina o acetilcolina. 11. 6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-5 en el que el sistema de captación de imágenes del paso e) comprende una cámara fotográfica de alta tasa de disparo. 12. 7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 en el que se añade un paso f) que incluye la fijación del vaso y una técnica inmunohistoquímica y/o de microscopía electrónica. 13. 8. Kit que comprende células seleccionadas del grupo de las células progenitoras endoteliales, leucocitos, plaquetas y/o hematíes así como las soluciones tamponadas, los iones, las sustancias vasoactivas y los elementos necesarios para medir el tono vascular ex vivo según se define en el método de las reivindicaciones 1-7. 14. 9. Cámara de flujo en vaso ex vivo para la medición del tono vascular que incluye: 15. ¿ dos capilares de vidrio separados por una distancia de entre 1 y 50 mm para insertar entre ellos un segmento de vaso sanguíneo ex vivo de entre 200 y 2000 pm de diámetro externo y entre 2 y 70 mm de longitud; 16. ¿ un baño de órganos; 17. ¿ una bomba de infusión; 18. ¿ un sistema de presión hidrostática que comprende dos columnas con un tubo cada una de ellas y un tornillo de elevación de cada tubo con el que modificar la presión 19. entre 10 y 100 mmHg; 20. ¿ un manómetro; 21. ¿ un sistema de termorregulación de la temperatura del baño de órganos y de los 22. medios perfundidos en el vaso sanguíneo; 23. ¿ un sistema de captación de imágenes; 24. ¿ un microscopio. 25. 10. Cámara de flujo según la reivindicación 9 en la que el sistema de captación de imágenes comprende una cámara fotográfica de alta tasa de disparo.

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