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Resumen

Dna encoding the yellow mustard allergen (sinapis alba) sin a 3, and its applications. The invention includes the dna encoding the allergen sin a 3 of yellow mustard seeds (sinapis alba), recognized by more than 30% of patients allergic to this biological source. It also includes said recombinant dna cloned and expressed from eukaryotic host cells obtaining the recombinant protein correctly folded and maintaining immunological properties equivalent to those of the natural allergen. On the other hand, the invention relates to a method of isolation and purification of the natural allergen and to a method of purification of the recombinant allergen. Both the purified sin a 3 protein and the recombinant protein, the homologous proteins, the modified forms derived therefrom, the derivative fragments containing at least one allergenic epitope, can be used in the elaboration of allergy diagnosis methods as well as in the development of immunotherapy systems. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Reivindicaciones

1. Molécula polinucleotídica que comprende la secuencia de nucleótidos SEQ ID NO: 1. 2. Molécula polinucleotídica que comprende una secuencia que híbrida con SEQ ID NO: 1 en condiciones fuertemente restrictivas. 3. Molécula polinucleotídica que comprende una secuencia con, al menos, un 70% de identidad con SEQ ID NO:1. 4. Molécula según la reivindicación 3 en que la identidad con SEQ ID NO: 1 es de, al menos, el 80%. 5. Molécula polinucleotídica que comprende una secuencia que codifica un polipéptido que comprende la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 2. 6. Molécula polinucleotídica que comprende una secuencia que codifica un polipéptido que comprende un fragmento de SEQ ID NO: 2 con, al menos, un epítopo de Sin a 3 de Sinapis alba. 7. Molécula polinucleotídica que comprende una secuencia que codifica un polipéptido con las propiedades antigénicas y alergénicas de Sin a 3 de Sinapis alba. 8. Polipéptido aislado que comprende la secuencia aminoacídica SEQ ID NO: 2. 9. Polipéptido aislado que comprende una secuencia con, al menos, un 70% de identidad con SEQ ID NO: 2 que conserva las características antigénicas de Sin a 3 de Sinapis alba. 10. Polipéptido según la reivindicación 9 en que la identidad con SEQ ID NO: 2 es de, al menos, el 80%. 11. Vector recombinante caracterizado porque comprende una secuencia de nucleótidos definida según las reivindicaciones 1 a 7. 12. Vector recombinante según la reivindicación 11 que comprende el plásmido pPICZ[alpha] A. 13. Células eucariotas hospedadoras transfectadas con los vectores recombinantes de las reivindicaciones 11 ó 12. 14. Células eucariotas según la reivindicación 13 que pertenecen a la especie Pichia pastoris. 15. Células eucariotas según la reivindicación 14 que pertenecen a la cepa KM71. 16. Uso de cualquiera de las moléculas polinucleotídicas de las reivindicaciones 1-7 en el diagnóstico de la alergia a Sin a 3 de Sinapis alba. 17. Uso de cualquiera de los polipéptidos de las reivindicaciones 8-10 en el diagnóstico de la alergia a Sin a 3 de Sinapis alba. 18. Uso según la reivindicación 17 en el que el diagnóstico se realiza in vitro mediante técnicas inmunológicas. 19. Uso según la reivindicación 18 en el que la técnica inmunológica es el ELISA. 20. Uso de cualquiera de los polipéptidos de las reivindicaciones 8-10 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la alergia a Sin a 3 de Sinapis alba. 21. Composición farmacéutica que comprende un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 8-10 y un excipiente farmacéuticamente aceptable. 22. Método para la purificación de cualquiera de los polipéptidos de las reivindicaciones 8-10 que comprende las siguientes etapas: a)crecer en un medio de cultivo adecuado cualquiera de las células eucariotas definidas en las reivindicaciones 13-15; b)separar las células del medio extracelular una vez finalizada la etapa a); c)dializar el medio extracelular obtenido en la fase b) d)utilizar el medio extracelular obtenido en la etapa c) en 2 etapas cromatográficas de penetrabilidad mediante resina de filtración en gel. vskip 1.000000 baselineskip 23. Método, según la reivindicación 22, en el que se a PRG nade una etapa e) de aplicación de una cromatografía de fase reversa de alta resolución (HPLC) al resultado de la etapa d). 24. Método para la purificación de Sin a 3 de Sinapis alba que comprende las siguientes etapas: a)obtener el extracto proteico de las semillas de Sinapis alba; b)utilizar el extracto proteico obtenido en 2 etapas cromatográficas de penetrabilidad mediante resina de filtración en gel. vskip 1.000000 baselineskip 25. Método, según la reivindicación 24, en el que se a PRG nade una etapa c) de aplicación de una cromatografía de fase reversa de alta resolución (HPLC) al resultado de la etapa b).

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