Resumen
The method involves production of Fra e 1 by recombinant technology in yeast Pichia pastoris, which implies the use of nucleotide sequences obtained by the mutagenesis. A major allergen is isolated, purified and characterized from fraxinus excelsior pollen, and is recognized by 65 percent of patients allergic to the biological source. The allergen is cloned and expressed in the recombinant deoxyribonucleic acid that encodes the Fra e 1 allergen of ash pollen. The recombinant protein is produced in yeast. The resulting fragments contain an epitope. An independent claim is also included for a recombinant variant of fraxinus excelsior ash pollen allergen, Fra e 1.
Reivindicaciones
1. 1. Moléculas de DNA recombinantecaracterizadas por SEQ ID NO: 1 que codifican un polipéptidocon actividad alergénica y que poseen, al menos, un epítopoalergénico común con el alergeno Fra e 1 de Fraxinusexcelsior. 2. 2. Moléculas de DNA recombinante, omodificaciones de las mismas, según reivindicación 1, que codificanpolipéptidos con, al menos, un epítopo de Fra e 1 en su estructura, unido a un polipéptido adicional, o modificado química oenzimáticamente. 3. 3. Moléculas de DNA recombinantecaracterizadas por hibridar en condiciones fuertementerestrictivas con la secuencia descrita en SEQ ID NO: 1. 4. 4. Moléculas de DNA recombinante obtenidas apartir de la SEQ ID NO: 1 y 2, conteniendo una secuencia denucleótidos que codifica un polipéptido con actividad alergénicaidéntica o reducida (hipoalergénica) con respecto a Fra e 1 deFraxinus excelsior. 5. 5. Polipéptido recombinante correspondiente alalergeno Fra e 1 de Fraxinus excelsior, o fragmentos dedicho polipéptido, según reivindicaciones 1 y 2, caracterizado por la secuencia dada en SEQ ID NO: 3 y 4 quepresentan la antigenicidad de, al menos, un epítopo de Fra e 1. 6. 6. Polipéptidos que posean una secuencia deaminoácidos según reivindicación 5, y que presenten unaalergenicidad atenuada. 7. 7. Polipéptidos o fragmentos de dichospolipéptidos de polen de Fraxinus excelsior con, al menos, un epítopo de Fra e 1, según reivindicaciones anteriores, que seproduzcan recombinantes unidos a un polipéptido adicional. 8. 8. Polipéptidos de polen de Fraxinusexcelsior, según reivindicaciones 5, 6, 7, que esténmodificados química o enzimáticamente. 9. 9. Un vector de expresión eucariota, ypreferentemente pPICZα-A, que contenga lassecuencias caracterizadas por SEQ ID NO: 1 y 2 segúnreivindicaciones 1, 2, 3 y 4 cuya expresión dé lugar a laproducción de los polipéptidos caracterizados por SEQ ID NO:2 según reivindicaciones 5, 6, 7 y 8. 10. 10. Un organismo hospedador eucariota, preferentemente la levadura Pichia pastoris, transformadocon la construcción formada según reivindicación 9. 11. 11. Un método para producir las formasrecombinantes correspondientes a las secuencias polipeptídicasdescritas en las reivindicaciones 5, 6, 7 y 8, en el sistemaeucariótico de levadura Pichia pastoris, y preferentementede la cepa KM71, crecidas en medio rico, caracterizado poruna cromatografía de intercambio iónico enDEAE-celulosa, una de penetrabilidad en SephadexG-75. 12. 12. Un método para producir formas recombinantessegún reivindicación 11 en el que se adiciona una cromatografía enuna columna C-18 de fase reversa de HPLC. 13. 13. Un método para el aislamiento del alergenoFra e 1 a partir del polen de Fraxinus excelsior utilizandouna cromatografía de penetrabilidad en SephadexG-75 y una columna de fase reversa nucleosilC-18 de HPLC. 14. 14. Utilización de los péptidos de lasreivindicaciones 5-8 para preparar un medicamentoútil en el tratamiento de alergias. 15. 15. Utilización de las moléculas segúnreivindicaciones 1-8 en el diagnóstico "invitro" de la alergia. 16. 16. Aplicación de las moléculas recombinantes delas reivindicaciones 1-8 para el diseño de vacunasdestinadas a la inmunoterapia de la alergia. 17. 17. Aplicación de las moléculas recombinantes delas reivindicaciones 1-4 para producir péptidos, según reivindicaciones 5-8, que contengan al menosun epítopo T alergénico, capaces de actuar como vacunas. 18. 18. Aplicación de las moléculas recombinantes delas reivindicaciones 1-4 en la producción deisoformas recombinantes hipoalergénicas que tengan disminuída oanulada su unión a IgE para el tratamiento de alergias.
