Resumen
Method to detect individuals of the equine species carrying the genetic cause responsible for the perlino or isabelo layers. The present invention relates to an in vitro method for detecting individuals of the equine species carrying the pearl allele (cprl) for the selection of the coloration of the coat on horse according to the demands of the market, personal preferences or the requirements for the inclusion in the pedigree of the different races, as well as to verify the segregation of this allele in particular pedigrees. Said method comprises the detection of a point mutation identified in the matp (membrane-associated transporter protein) gene, the non-synonymous substitution of a g for an a at position c.100g> a in exon 4 of the matp gene, which it results in the change of the amino acid alanine to threonine at position 329 of the matp protein of the individual. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Reivindicaciones
1. REIVINDICACIONES 2. 1. Método in vitro para detectar individuos de la especie equina portadores de la causa genética responsable de las capas perlino o isabelo, que comprende detectar la mutación c.100G>A del exón 4 del gen MATP y/o el cambio de aminoácido p.Ala329Thr en la proteína MATP del individuo. 3. 2. Método según la reivindicación 1 en el que la secuencia del exón 4 mutado del gen MATP está caracterizada por SEQ ID Nº: 17 y la secuencia de la proteína MATP esta caracterizada por SEQ 1D Nº: 19. 4. 3. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores que incluye la detección de cualquiera de las mutaciones puntuales que se encuentran en desequilibrio de ligamiento con la mutación c.100G>A del exón 4. 5. 4. Método según la reivindicación 3 que incluye la detección de la mutación c.48T>C en el intrón 1 y/o de la mutación c.266C>T en el exón 3 del gen MATP. 6. 5. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el individuo de la especie equina es macho o hembra y pertenece al grupo formado por las razas: Pura Raza Española (P.R.E.), Lusitano, Quarter Horse, Paint o cualquier otra población o raza que presente un fenotipo de dilución de la coloración de la capa. 7. 6. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores que se realiza sobre muestras aisladas de ácidos nucleicos extraídos a partir de una muestra biológica de un individuo de la especie equina. 8. 7. Método según la reivindicación 6 en el que la muestra biológica es de sangre, folículos pilosos, frotis bucal, o cualquier tejido que contenga ADN viable. 9. 8. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la mutación c.100G>A del exón 4 del gen MATP se detecta mediante la técnica de análisis del polimorfismo en la conformación de las cadenas simples (ADN monocatenario -ADNmc) de ADN de regiones amplificadas por PCR (PCR-SSCP, PCR Single Strand Conformational Polymorphism), la técnica del análisis de los polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restricción de regiones amplificadas por PCR (PCR-RFLP, PCR Restriction Fragment Length Polymorphism), la secuenciación directa, la pirosecuenciación, la reacción de ligado por oligonucleótidos (OLA), la técnica de high resolution melting (HRM), el ensayo de discriminación alélica por TaqMan, la hibridación en microarray, la extensión del cebador o primer extension (PE), o cualquier otra técnica. 10. 9. Método in vitro para la verificación del parentesco entre individuos de la especie equina que incluye detectar la mutación c.100G>A del exón 4 del gen MATP y/o el cambio de aminoácido p.Ala329Thr en la proteína MATP de dos o mas individuos. 11. 10. Método según la reivindicación 9 en el que la secuencia del exón 4 del gen MATP mutado está caracterizada por SEQ ID Nº: 17 y la secuencia de la proteína MATP mutada está caracterizada por SEQ ID Nº: 19. 12. 11. Método según cualquiera de las reivindicaciones 9-10 que incluye la detección de cualquiera de las mutaciones puntuales que se encuentran en desequilibrio de ligamiento con la mutación c.100G>A del exón 4. 13. 12. Método según la reivindicación 11 que incluye la detección de la mutación c.48T>C en el intrón 1 y/o de la mutación c.266C>T en el exón 3 del gen MATP. 14. 13. Método según cualquiera de las reivindicaciones 9-12 en el que cada individuo de la especie equina es macho o hembra y pertenece al grupo formado por las razas: Pura Raza Española (P.R.E.), Lusitano, Quarter Horse, Paint o cualquier otra población o raza que presente un fenotipo de dilución de la coloración de la capa. 15. 14. Método según cualquiera de las reivindicaciones 9-13 que se realiza sobre muestras aisladas de ácidos nucleicos extraídos a partir de una muestra biológica de un individuo de la especie equina. 16. 15. Método según la reivindicación 14 en el que la muestra biológica es de sangre, folículos pilosos, frotis bucal, o cualquier tejido que contenga ADN viable. 17. 16. Método según cualquiera de las reivindicaciones 9-15 en el que la mutación c.100G>A del exón 4 del gen MATP se detecta mediante la técnica de análisis del polimorfismo en la conformación de las cadenas simples (ADN monocatenario -ADNmc) de ADN de regiones amplificadas por PCR (PCR-SSCP, PCR Single Strand Conformational Polymorphism), la técnica del análisis de los polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restricción de regiones amplificadas por PCR (PCRRFLP, PCR Restriction Fragment Length Polymorphism), la secuenciación directa, la pirosecuenciación, la reacción de ligado por oligonucleótidos (OLA), la técnica de high resolution melting (HRM), el ensayo de discriminación alélica por TaqMan, la hibridación en microarray, la extensión del cebador o primer extension (PE), o cualquier otra técnica. 18. 17. Molécula de ADN aislado que comprende la secuencia nucleotídica caracterizada por SEQ ID Nº: 17. 19. 18. Molécula polipeptídica que comprende la secuencia aminoacídica caracterizada por SEQ ID Nº: 18. 20. 10 21. 11
