Resumen
Method for the regeneration of neurites from adult and aged neurons of the spiral ganglion. The present invention relates to a method for the regeneration of neurites from adult and aged neurons of the spiral ganglion that includes both a mechanical and an enzymatic dissociation with trypsin at 37º c, the adhesion of the explants to positively charged surfaces and a conditioned culture medium that incorporates horse serum, l-glutamine, supplements b27 and n2 simultaneously and growth factor gap-43. The invention can be applied in regenerative medicine to solve problems related to hearing loss and different sensorineural deafness including presbycusis. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Reivindicaciones
1. 1. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral quecomprende los siguientes pasos: 2. \hbox{Recombinant Human Insulin Growth Factor I (GF-I) , Murine Nerve Growth Factor (NGF) .} 3. 2. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral, segúnla reivindicación 1, caracterizado porque la disociaciónenzimática con tripsina y EDTA a 37ºC se realiza durante 10minutos. 4. 3. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral, segúncualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizadoporque en la disociación enzimática la inhibición de la tripsinacon suero de caballo se realiza durante 10 minutos. 5. 4. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral, segúnla reivindicación 1, caracterizado porque la polimerizaciónde fibronectina, laminina, colágeno para la adhesión del explantese realiza a 8ºC durante 24 horas. 6. 5. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral, segúnla reivindicación 1, caracterizado porque lapoli-L-lisina polimeriza a 37ºCdurante 8 horas. 7. 6. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral, segúnla reivindicación 1, caracterizado porque la concentraciónde los factores de crecimiento utilizados es entre 10 y 100 ng/mlde medio de cultivo acondicionado. 8. 7. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral, segúnla reivindicación 6, caracterizado porque la concentraciónde Brain Derived Growth Factor (BDGF) es de 40 ng/ml demedio de cultivo acondicionado. 9. 8. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral, segúnla reivindicación 6, caracterizado porque la concentraciónde Growth Associated Protein- 43 (GAP-43) esde 25 ng/ml de medio de cultivo acondicionado. 10. 9. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral, segúnla reivindicación 1, caracterizado porque la concentraciónde glucosa en el medio de cultivo acondicionado es entre 0, 5 y1%. 11. 10. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral, segúnla reivindicación 9, caracterizado porque la concentraciónde glucosa en el medio de cultivo acondicionado es de 0, 6%. 12. 11. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral, segúnla reivindicación 1, caracterizado porque la concentraciónde glutamina en el medio de cultivo acondicionado es entre 0, 5 y1%. 13. 12. Método para la regeneración de neuritas apartir de neuronas adultas y envejecidas de ganglio espiral, segúnla reivindicación 11, caracterizado porque la concentraciónde glutamina en el medio de cultivo acondicionado es del 1%. 14. 13. Uso del método descrito en lasreivindicaciones anteriores para obtener neuritas con las quefabricar implantes para el tratamiento de sorderas neurosensorialesen mamíferos. 15. 14. Uso según reivindicación 13, donde lassorderas neurosensoriales son hipoacusias.
