Resumen
Immunosensing electrochemical platform and method for the detection and/or quantification of adulterations in milk and dairy products. The present invention relates to a method for detecting and/or quantifying the presence of colostrum in milk and dairy products as well as the fraudulent incorporation of milk from undeclared origins, specifically bovine, ovine and/or goat milk. The method includes the capture and detection of immunoglobulin G (IgG) by anti-IgG antibodies on magnetic particles that are captured on printed working electrodes. The invention also refers to an immunosensing electrochemical platform that includes the necessary elements to detect and/or quantify these possible adulterations and fraud: magnetic particles, anti-bovine, ovine and goat IgG antibodies without labeling, anti-IgG antibodies of the 3 Species conjugated with a molecule for the generation and amplification of the electrochemical signal, and printed electrodes working on a magnetic support. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Reivindicaciones
1. REIVINDICACIONES 1. Método de detección y/o cuantificación de adulteraciones en leche y productos lácteos que incluye los siguientes pasos: a- elaborar inmunocaptores magnéticos mediante la unión de anticuerpos captores antiinmunoglobulina G (IgG) de bovino (Bov-CAb) a partículas magnéticas, anticuerpos captores anti-lgG de ovino (Ovi-CAb) a otras partículas magnéticas y anticuerpos captores anti-lgG de caprino (Cap-CAb) a otras partículas magnéticas; b- elaborar partículas magnéticas definitivas incubando los inmunocaptores magnéticos del paso a- con la muestra de leche a analizar y con anticuerpos detectores anti IgG de bovino (Bov-DAb), anticuerpos detectores anti IgG de ovino (Ovi-DAb) y anticuerpos detectores anti IgG de caprino (Cap-DAb) todos ellos conjugados con una molécula de generación y amplificación de la respuesta electroquímica; c- capturar las partículas magnéticas definitivas del paso b- sobre un electrodo impreso de trabajo y colocar dicho electrodo sobre un soporte magnético; donde, en el paso b-, los inmunocaptores magnéticos con Bov-CAb se incuban individualmente con la muestra y con Bov-DAb, los inmunocaptores magnéticos con Ovi- CAb se incuban individualmente con la muestra y con Ovi-DAb y los inmunocaptores magnéticos con Cap-CAb se incuban individualmente con la muestra y con Cap-DAb. 2. Método según la reivindicación 1 en el que la muestra de leche del paso b- se diluye entre 100 veces y 10.000.000 veces antes de la incubación. 3. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que las partículas magnéticas son nanopartículas o micropartículas. 4. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que las partículas magnéticas tienen propiedades superparamagnéticas. 5. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la molécula de generación y amplificación de la respuesta electroquímica es HRP, poli-HRP o fosfatasa alcalina. 6. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el electrodo de trabajo está realizado con un material seleccionado del grupo: oro, carbono, platino, CD-trodos, plata, mercurio, grafito, carbón vitreo, nanotubos de carbono, nanocables de oro, nanopartículas de oro, nanopartículas de óxido metálico, pasta de carbono, diamante y compuestos dopados con boro. 7. Método según la reivindicación 6 en el que el electrodo es un electrodo de trabajo impreso de carbono. 8. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el soporte magnético incluye un imán de neodimio. 9. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el soporte magnético incluye un imán embebido en la propia estructura del soporte magnético. 10. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores que incluye el siguiente paso: d- capturar partículas magnéticas definitivas de bovino individualmente en un electrodo impreso de trabajo; capturar partículas magnéticas definitivas de ovino individualmente en un electrodo impreso de trabajo; y/o capturar partículas magnéticas definitivas de caprino individualmente en un electrodo impreso de trabajo. 11. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que las partículas magnéticas definitivas tienen una concentración sobre el electrodo impreso de trabajo comprendida entre 4 y 5 pg/mm2 12. Plataforma electroquímica inmunosensora para la detección y/o cuantificación de adulteraciones en leche que incluye: - inmunocaptores magnéticos de bovino, ovino y caprino formados por la unión de anticuerpos captores anti-inmunoglobulina G (IgG) de bovino (Bov-CAb) a partículas magnéticas, anticuerpos captores anti-lgG de ovino (Ovi-CAb) a partículas magnéticas y anticuerpos captores anti-lgG de caprino (Cap-CAb) a partículas magnéticas; - anticuerpos detectores anti-lgG de bovino (Bov-DAb), anticuerpos detectores anti-lgG de ovino (Ovi-DAb) y anticuerpos detectores anti-lgG de caprino (Cap-DAb) todos ellos conjugados con una molécula de generación y amplificación de la respuesta electroquímica; - un electrodo impreso de trabajo sobre un soporte magnético para capturar los tres tipos de partículas magnéticas definitivas que se obtienen al incubar los inmunocaptores magnéticos de bovino, ovino y caprino con la muestra de leche a analizar y con el anticuerpo detector anti-lgG correspondiente. 13. Plataforma electroquímica inmunosensora según la reivindicación 12 en la que las partículas magnéticas son nanopartículas o micropartículas. 14. Plataforma electroquímica inmunosensora según cualquiera de las reivindicaciones 12-13 en la que las partículas magnéticas tienen propiedades superparamagnéticas. 15. Plataforma electroquímica inmunosensora según cualquiera de las reivindicaciones 12-14 en la que la molécula de generación y amplificación de la respuesta electroquímica es HRP, poli-HRP o fosfatasa alcalina. 16. Plataforma electroquímica inmunosensora según cualquiera de las reivindicaciones 12-15 en la que el electrodo de trabajo está realizado con un material seleccionado del grupo: oro, carbono, platino, CD-trodos, plata, mercurio, grafito, carbón vitreo, nanotubos de carbono, nanocables de oro, nanopartículas de oro, nanopartículas de óxido metálico, pasta de carbono, diamante y compuestos dopados con boro. 17. Plataforma electroquímica inmunosensora según la reivindicación 16 en la que el electrodo es un electrodo de trabajo impreso de carbono. 18. Plataforma electroquímica inmunosensora según cualquiera de las reivindicaciones 12-17 en la que el soporte magnético incluye un imán de neodimio. 19. Plataforma electroquímica inmunosensora según cualquiera de las reivindicaciones 12-18 en la que el soporte magnético incluye un imán embebido en la propia estructura del soporte magnético. 20. Plataforma electroquímica inmunosensora según cualquiera de las reivindicaciones 12-19 que incluye: - un electrodo impreso de trabajo sobre un soporte magnético para capturar las partículas magnéticas definitivas que se obtienen al incubar los inmunocaptores magnéticos de bovino con la muestra de leche a analizar y con el anticuerpo detector anti-lgG de bovino conjugado con una molécula de generación y amplificación de la respuesta electroquímica.; - un electrodo impreso de trabajo sobre un soporte magnético para capturar las partículas magnéticas definitivas que se obtienen al incubar los inmunocaptores magnéticos de ovino con la muestra de leche a analizar y con el anticuerpo detector anti-lgG de ovino conjugado con una molécula de generación y amplificación de la respuesta electroquímica.; y/o - un electrodo impreso de trabajo sobre un soporte magnético para capturar las partículas magnéticas definitivas que se obtienen al incubar los inmunocaptores magnéticos de caprino con la muestra de leche a analizar y con el anticuerpo detector anti-lgG de caprino conjugado con una molécula de generación y amplificación de la respuesta electroquímica. 21. Plataforma electroquímica inmunosensora según cualquiera de las reivindicaciones 12-20 en la que los elementos de la reacción inmunológica están en cantidad suficiente para que la concentración de partículas magnéticas definitivas sobre el electrodo impreso de trabajo esté comprendida entre 4 y 5 pg/mm2.
