Resumen
The invention describes a new thermostable selection marker for the genetic manipulation of bacteria of the genus thermus spp., in particular, with a polynucleotide which, when expressed, the resulting protein provides the bacteria of the genus thermus spp. A streptomycin-dependent phenotype, which has different applications in the field of biotechnology as a marker for the selection of cloning and expression of genes of interest or in the specific deletion of genes. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Reivindicaciones
1. 1. Un polinucleótido aislado constituido por lasecuencia de nucleótidos que codifica la proteína cuya secuencia deaminoácidos se muestra en la SEQ ID NO: 1, o una proteínafuncionalmente equivalente. 2. 2. Polinucleótido según la reivindicación 1, cuya secuencia de nucleótidos está constituida por la secuencia denucleótidos mostrada en la SEQ ID NO: 2. 3. 3. Un ácido nucleico que comprende unpolinucleótido según la reivindicación 1 ó 2. 4. 4. Una construcción génica que comprende unácido nucleico según la reivindicación 3. 5. 5. Construcción según la reivindicación 4, dondedicha construcción génica comprende, además, un marcador deselección. 6. 6. Construcción según la reivindicación 5, dondedicho marcador de selección es un gen de resistencia. 7. 7. Construcción según la reivindicación 6, dondedicho gen de resistencia es el gen quimérico de resistenciatermoestable a kanamicina. 8. 8. Construcción según cualquiera de lasreivindicaciones 4 a 7, donde dicha construcción comprende, además, un origen de replicación en Thermus spp. 9. 9. Un vector que comprende un polinucleótidosegún la reivindicación 1 ó 2, un ácido nucleico según lareivindicación 3 o una construcción génica según cualquiera de lasreivindicaciones 4 a 8. 10. 10. Una bacteria del género Thermus spp.que comprende un polinucleótido según la reivindicación 1 ó 2, unácido nucleico según la reivindicación 3, una construcción génicasegún cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8 o un vector según lareivindicación 9. 11. 11. Bacteria según la reivindicación 10, endonde dicha bacteria del género Thermus spp. se seleccionaentre T. brockianus, T. scotoductus, T. filiformis y T.oshimai, preferentemente, T. thermophilus y T.aquaticus. 12. 12. Una composición que comprende bacteriassegún cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11. 13. 13. Empleo de un polinucleótido según lareivindicación 1 ó 2, un ácido nucleico según la reivindicación 3, una construcción génica según cualquiera de las reivindicaciones 4a 8, como marcador de selección termoestable. 14. 14. Empleo de un polinucleótido según lareivindicación 1 ó 2, un ácido nucleico según la reivindicación 3, una construcción génica según cualquiera de las reivindicaciones 4a 8, o un vector según la reivindicación 9, para proporcionar unfenotipo estreptomicina dependiente a una bacteria termófila delgénero Thermus spp. 15. 15. Empleo de un polinucleótido según lareivindicación 1 ó 2, un ácido nucleico según la reivindicación 3, una construcción génica según cualquiera de las reivindicaciones 4a 8, para el diseño de un plásmido termoestable para expresar ungen de interés en una bacteria termófila del género Thermusspp. 16. 16. Empleo según la reivindicación 15, en dondedicho plásmido es integrativo o replicativo. 17. 17. Empleo de un vector según la reivindicación9, para obtener un mutante de deleción dirigida de un genespecífico en una bacteria termófila del género Thermusspp. 18. 18. Empleo según cualquiera de lasreivindicaciones 14 a 17, en donde dicha bacteria termófila delgénero Thermus spp. pertenece a las especies T.thermophilus, T. aquaticus, T. brockianus, T. scotoductus, T.filifbrmis y T. oshimai. 19. 19. Empleo según cualquiera de lasreivindicaciones 15 ó 16, donde el gen de interés codifica unaproteína, preferentemente, una enzima. 20. 20. Un método para producir una proteína deinterés en bacterias termófilas del género Thermus spp. quecomprende 21. a) 22. b) 23. c) 24. d) 25. 21. Un método para obtener un mutante dedeleción dirigida de un gen específico en una bacteria termófiladel género Thermus spp. que comprende 26. a) 27. b) 28. c) 29. d) 30. e) 31. 22. Una proteína aislada constituida por lasecuencia de aminoácidos que se muestra en la SEQ ID NO: 1 o unaproteína funcionalmente equivalente de la misma.
