madrid2i

Resumen

Gene construction and methods to detect antifungal and antitumor compounds. The present invention relates to a gene construct for the amplification of the response to signals that activate the cell integrity pathway (cwi) in saccharomyces cerevisiae. It comprises a hyperactive allele of the mapkk of this route, under the control of the promoter of a gene induced by rlm1, which implies the creation of a positive feedback loop whose stimulation leads to cell death. The invention also relates to methods for detecting agents that alter the cell wall or the function of components of the route itself, which allows the detection of antifungal and/or antitumor pharmacological compounds. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Reivindicaciones

1. REIVINDICACIONES 2. 1. Construcción génica que comprende los siguientes componentes, en el orden que se indica en la dirección de transcripción de 5' a 3': -la secuencia promotora de un gen inducible por el factor de transcripción Rlm1 de la ruta de integridad celular (CWI) de Saeeharomyees eerevisiae, -una secuencia de ONA cuya expresión da lugar a la proteína Mkk1 de Saeeharomyees eerevisiae con una mutación que produce la modificación del aminoácido S386 por P386 en dicha proteína, según se describe en SEO ID NO: 3 y denominada Mkk1s386P, y -una secuencia de terminación de la transcripción; en la que la distancia entre el extremo 3' de la secuencia promotora y el extremo 5' de la secuencia de ONA cuya expresión da lugar a la proteína Mkk1 S386P es menor o igual a 18 nucleótidos y la distancia entre el extremo 3' de la secuencia de ONA cuya expresión da lugar a la proteína Mkk1 S386P y el extremo 5' de la secuencia de terminación es menor o igual a 18 nucleótidos. 3. 2. Construcción génica en la que la secuencia de ONA cuya expresión da lugar a la proteína Mkk1s386P es el polinucleótido que se describe en SEO ID NO: 2, denominado MKK1s386P. 4. 3.-Construcción génica según cualquiera de las reivindicaciones 1-2 en la que la secuencia promotora es la región promotora del gen YKL 161e, caracterizada por SEO ID NO: 1. 5. 4. Construcción génica según cualquiera de las reivindicaciones 1-3 en la que la secuencia de terminación de la transcripción es la secuencia de terminación de gen ADH1 de Saeeharomyees eerevisiae, caracterizada por SEO ID NO: 4. 6. 5. Construcción génica caracterizada por SEO ID NO: 13. 7. 6. Vector que contiene cualquiera de las construcciones definidas en las 8. reivindicaciones 1-5. 9. 7. Célula de S. cerevisiae que contiene el vector definido en la reivindicación 6. 10. 8. Célula recombinante de S. cerevisiae que incluye en su genoma cualquiera de las construcciones definidas en las reivindicaciones 1-5. 11. 9. Cepa de S. cerevisiae depositada en la Colección de Cultivos Tipo (CECT) con el número de acceso CECT13115. 12. 10. Método para detectar compuestos antifúngicos que alteran la pared celular fúngica que incluye los siguientes pasos: a) inocular una cantidad suficiente de una cepa de S. cerevisiae según se define en cualquiera de las reivindicaciones 7-9 en medio de cultivo que contiene, en sucesivos tubos, microtubos o pocillos, concentraciones crecientes de los productos que se desea evaluar; b) incubar el medio de cultivo inoculado del paso a); c) determinar el crecimiento de la cepa inoculada en el paso a); d) seleccionar elllos productols incluidols en el medio de cultivo del paso a) en el que se detecte menor crecimiento de la cepa de S. cerevisiae definida en las reivindicaciones 7-9 con respecto a una cepa silvestre utilizada como control. 13. 11. Método para detectar compuestos antitumorales o antifúngicos inhibidores de la señalización a través de la ruta CWI que incluye los siguientes pasos: a) inocular una cantidad suficiente de una cepa de S. cerevisiae según se define en cualquiera de las reivindicaciones 7-9 en medio de cultivo que contiene un compuesto que estimula la ruta CWI y, en sucesivos tubos, microtubos o pocillos, concentraciones crecientes de los productos que se desea evaluar; b) incubar el medio de cultivo inoculado del paso a); c) determinar el crecimiento de la cepa inoculada en el paso a); 14. d) seleccionar el/los producto/s incluido/s en el medio de cultivo del paso a) en el que se detecte mayor crecimiento de la cepa de S. cerevísíae definida en las reivindicaciones 7-9 con respecto a una cepa silvestre utilizada como control. 15. 5 12. Método según la reivindicación 11 en el que el compuesto estimulador de la ruta CWI del paso a) es el Rojo Congo. 16. 13. Uso de la construcción génica, los vectores y/o las células definidas en las 17. reivindicaciones 1-9 en la detección de compuestos antifúngicos y/o de 10 compuestos antitumorales. 18. 14. Kit para la detección de compuestos antifúngicos y/o antitumorales que incluye las construcciones génicas, los vectores y/o las células eucariotas definidas en las reivindicaciones 1-9.

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