Resumen
The present invention relates to the use, in medicine, of a terminal protein of a bacteriophage virus with protein-primed DNA replication, preferably of the family Podoviridaeo or Tectiviridae, characterized in that said protein comprises, first, at least one nuclear localization amino acid sequence, i.e. an amino acid sequence with NLS function, when said protein is expressed in mammalian cells, and, second, at least one amino acid sequence for covalent bonding to the ends of the DNA. The present invention is used for cases in which an exogenous DNA is introduced into the nucleus of cells of a mammal, so that said DNA may have a therapeutic effect. The present invention may also be used for the introduction of DNA fragments into human cells for the expression of heterologous genes for use in gene therapy.
Reivindicaciones
1. REIVINDICACIONES 1. Uso de una proteina terminal de un virus bacteriófago en la preparación de un medicamento o composición farmacéutica útil en medicina, caracterizado por que dicha proteina comprende: a) al menos una secuencia aminoacidica de localización al núcleo celular en células de mamífero, con una secuencia consenso seleccionada de entre el siguiente grupo: i) K-x (0, 2 ) -R-x (0, 1) -K, ii) K-x (1, 2) -K-x (1, 2 ) -R, y iii) K-K-x (0, 1) -K, donde "x" es un amino ácido, y "0","1", y "2" es la posición que ocupa en la secuencia dicho amino ácido; y b) al menos una secuencia aminoacidica de unión covalente a los extremos del ADN, determinada mediante ensayos bioquímicos funcionales . 2. Uso de una proteína terminal según la reivindicación 1, caracterizada por que el virus bacteriófago es de la familia Podovírídae o Tectívírídae . 3. Uso de una proteína terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizada por que dicha proteína terminal comprende en el tercio N-terminal una proporción de residuos aminoacídicos básicos del 21,8 al 34,5%, agrupados en grupos cargados positivamente predominantes respecto a las cargas negativas . 4. Uso de una proteína terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizada por que la proteína terminal tiene una identidad en su secuencia de aminoácidos igual o mayor del 78% respecto a la proteína terminal del virus bacteriófago Φ29 con SEQ ID No: 1. 5. Uso de una proteina terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizada por que la proteina terminal es la proteina terminal del virus bacteriófago Φ29 con SEQ ID No: 1. 6. Uso de una proteina terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizada por que la proteina terminal es la proteina terminal del virus bacteriófago Nf con SEQ ID No: 4. 7. Uso de una proteina terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizada por que la proteina terminal es la proteina terminal del virus bacteriófago Cp-1 con SEQ ID No: 5. 8. Uso de una proteina terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizada por que la proteina terminal es la proteina terminal del virus bacteriófago Bam35 con SEQ ID No: 6. 9. Uso de una proteina terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizada por que la proteina terminal es la proteina terminal del virus bacteriófago PRD1 con SEQ ID No: 7. 10. Uso de una proteina terminal según la reivindicación 5, caracterizada por que comprende un dominio N-terminal con SEQ ID No: 2. 11. Uso de una proteina terminal según la reivindicación 10, caracterizada por que el dominio N-terminal comprende la secuencia de aminoácidos 1-37 con SEQ ID No: 3. 12. Uso de una proteina terminal según cualquiera de las reivindicaciones 10-11, caracterizada por que comprende los grupos de Usinas <,25>KAK <27>' y <,32>KKK <34>' . 13. Uso de una proteina terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-12, caracterizada por que dicha proteina se emplea como vehículo de transporte de ADN al interior del núcleo celular de un mamífero para la trasferencia de genes en terapia génica . HOJA DE REEMPLAZO (Regla 26) 14. Uso de una proteina terminal según la reivindicación 13, caracterizado por que dicha proteina terminal se encuentra unida covalentemente a los extremos del ADN a transportar. 15. Uso de una proteina terminal según la reivindicación 14, caracterizado por que la proteina TP representa una fracción de al menos 0,478% de la masa del ADN a transportar. 16. Uso de una proteina terminal según cualquiera de las reivindicaciones 13-15, caracterizado por que el ADN a transportar se encuentra unido al menos a una molécula de interés . 17. Uso de una proteina terminal según la reivindicación 16, caracterizado por que la molécula de interés se seleccionada entre: un anticuerpo para el reconocimiento de tipos celulares específicos, un péptido para el transporte a través de la membrana plasmática, una proteína para escape del endosoma, un dominio de unión a secuencias específicas de ADN y un dominio estimulador de la recombinación homologa. 18. Uso de una proteína terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-17, caracterizada por que dicha proteína se emplea como herramienta en un procedimiento biotecnológico . 19. Uso de una proteína terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-18, caracterizada por que dicha proteína se emplea para potenciar la inserción génica. 20. Uso de una proteína terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-19, caracterizada por que dicha proteína se emplea para aumentar el rendimiento de un experimento de transfección. 21. Método de tratamiento de un paciente basado en la transferencia de genes al núcleo celular para terapia génica, caracterizado por comprender el uso de una proteína terminal según cualquiera de las reivindicaciones 1-20. HOJA DE REEMPLAZO (Regla 26)
