Resumen
Genetically improved fructofuranosidase for obtaining the 6-kestose prebiotic. The present invention relates to a nucleotide sequence coding for an amino acid sequence derived from seq id no: 1 of schwanniomyces occidentalis, wherein said amino acid sequence has the substitution of the amino acid asparagine for the amino acid serine at position 52 and/or the substitution of the amino acid proline by the amino acid valine at position 232. Likewise, the present invention relates to the use of said nucleotide sequence, to the use of the expression vector, to the use of the expression product or to the use of the cell, for obtaining a enzyme product with fructofuranosidase activity by a heterologous expression system. Preferably the heterologous system is expressed in saccharomyces cerevisiae. Furthermore, the present invention relates to a method for obtaining said enzymatic product, to the enzymatic product with fructofuranosidase activity obtainable by said method. Preferably said enzyme product is capable of producing fructooligosaccharides such as for example 6-kestose and 1-kestose. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Reivindicaciones
1. 1. Secuencia nucleotídica que codifica para unasecuencia aminoacídica derivada de SEQ ID NO: 1 de Schwanniomycesoccidentalis, donde dicha secuencia aminoacídica presenta lasustitución del aminoácido Asparragina por el aminoácido Serina enla posición 52 y/o la sustitución del aminoácido Prolina por elaminoácido valina en la posición 232. 2. 2. Secuencia nucleotídica según lareivindicación 1, donde la secuencia aminoacídica es SEQ ID NO:2. 3. 3. Secuencia nucleotídica según lareivindicación 2, donde dicha secuencia nucleotídica, que codificapara SEQ ID NO: 2, es SEQ ID NO: 3. 4. 4. Secuencia nucleotídica según lareivindicación 1, donde la secuencia aminoacídica es SEQ ID NO:4. 5. 5. Secuencia nucleotídica según lareivindicación 4, donde dicha secuencia nucleotídica, que codificapara SEQ ID NO: 4, es SEQ ID NO: 5. 6. 6. Vector de expresión que comprende lasecuencia nucleotídica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a5. 7. 7. Producto de expresión de la secuencianucleotídica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o delvector de expresión según la reivindicación 6. 8. 8. Célula que comprende la secuencianucleotídica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, elvector de expresión según la reivindicación 6, el producto deexpresión según la reivindicación 7, o cualquiera de suscombinaciones. 9. 9. Uso de la secuencia nucleotídica segúncualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para la obtención de unproducto enzimático con actividad fructofuranosidasa mediante unsistema heterólogo de expresión. 10. 10. Uso del vector de expresión según lareivindicación 6, para la obtención de un producto enzimático conactividad fructofuranosidasa mediante un sistema heterólogo deexpresión. 11. 11. Uso de la célula según la reivindicación 7, para la obtención de un producto enzimático con actividadfructofuranosidasa mediante un sistema heterólogo de expresión. 12. 12. Uso del producto de expresión según lareivindicación 8, para la obtención de un producto enzimático conactividad fructofuranosidasa mediante un sistema heterólogo deexpresión. 13. 13. Uso según cualquiera de las reivindicaciones9 a 12, donde el sistema heterólogo expresa dicha secuencianucleotídica en Saccharomyces cerevisiae. 14. 14. Método para la obtención de un productoenzimático con actividad fructofuranosidasa que comprende: 15. 15. Método según la reivindicación 14, dondeademás comprende: 16. 16. Método según cualquiera de lasreivindicaciones 14 ó 15, donde la secuencia aminoacídica es SEQ IDNO: 2. 17. 17. Método según la reivindicación 16, dondedicha secuencia nucleotídica, que codifica para SEQ ID NO: 2, es SEQID NO: 3. 18. 18. Método según cualquiera de lasreivindicaciones 14 ó 15, donde la secuencia aminoacídica es SEQ IDNO: 4. 19. 19. Método según la reivindicación 14, dondedicha secuencia nucleotídica, que codifica para SEQ ID NO: 4, es SEQID NO: 5. 20. 20. Método según cualquiera de lasreivindicaciones 14 a 19, donde el microorganismo que pertenece auna especie diferente de Schwanniomyces occidentalis esSaccharomyces cerevisiae. 21. 21. Método según cualquiera de lasreivindicaciones 14 a 20, donde el cultivo de la célula según elpaso (c) se lleva a cabo a una temperatura de entre 28 y 30ºC. 22. 22. Producto enzimático con actividadfructofuranosidasa obtenible por el método según cualquiera de lasreivindicaciones 14 a 21. 23. 23. Producto enzimático según la reivindicación22, donde dicho producto tiene actividad transfructosidasa enpresencia de uno o varios sustratos glucídicos. 24. 24. Producto enzimático según la reivindicación23, donde los productos resultantes de la actividadtransfructosidasa son fructooligosacáridos. 25. 25. Producto enzimático según la reivindicación24, donde los fructooligosacáridos tienen enlacesβ-1, 2, y β-2, 6. 26. 26. Producto enzimático según la reivindicación25, donde los productos son 6-kestosa y1-kestosa. 27. 27. Método para la obtención de oligosacáridosque comprende: 28. 28. Método para la obtención de oligosacáridossegún la reivindicación 27, que además comprende:
