The Ole e 10 allergen isolation and purification technique comprises recombinant production of the protein in Pichia pastoris with isolation based on purified Olea europaea pollen. Also claimed is apparatus implementing the process which produces protein equivalent to the natural allergen in immunological properties, for use in immunotherapy.
1. 1. Moléculas de DNA recombinantecaracterizadas por SEQ ID NO: 1 que codifican un polipéptidocon actividad alergénica y que poseen, al menos, un epítopoalergénico común con el alergeno Ole e 10 de Oleaeuropaea. 2. 2. Moléculas de DNA recombinante, omodificaciones de las mismas, según reivindicación 1, que codificanpolipéptidos con, al menos, un epítopo de Ole e 10 en suestructura, unido a un polipéptido adicional, o modificado químicao enzimáticamente. 3. 3. Moléculas de DNA recombinantecaracterizadas por hibridar en condiciones fuertementerestrictivas con la secuencia descrita en SEQ ID NO: 1. 4. 4. Moléculas de DNA recombinantecaracterizadas por presentar, al menos, un 60% de identidadcon la descrita en SEQ ID NO: 1, conteniendo una secuencia denucleotidos que codifica un polipéptido con actividad alergénicaidéntica o reducida (hipoalergénica) con respecto a Ole e 10 deOlea europea. 5. 5. Polipéptido recombinante correspondiente alalergeno Ole e 10 de Olea europaea, o fragmentos de dichopolipéptido, según reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porla secuencia dada en SEQ ID NO: 2 que presentan la antigenicidadde, al menos, un epítopo de Ole e 10. 6. 6. Polipéptidos recombinantes del alergenohomólogo de Ole e 10 en otras especies relacionadas y norelacionadas filogenéticamente, o fragmentos de dichospolipéptidos, según reivindicaciones 3 y 4 que presentan laantigenicidad de, al menos, un epítopo de Ole e 10. 7. 7. Polipéptidos que posean una secuencia deaminoácidos según reivindicaciones 5 y 6, y que presenten unaalergenicidad atenuada. 8. 8. Polipéptidos o fragmentos de dichospolipéptidos de polen de Chenopodiaceas con, al menos, unepítopo de Ole e 10, según reivindicaciones anteriores, que seproduzcan recombinantes unidos a un polipéptido adicional. 9. 9. Polipéptidos de polen de Olea europaea, según reivindicaciones 5, 6, 7 y 8, que estén modificados química oenzimáticamente. 10. 10. Un vector de expresión eucariota, ypreferentemente pPICZαA, que contenga las secuenciascaracterizadas por SEQ ID NO: 1 según reivindicaciones 1, 2, 3y 4 cuya expresión dé lugar a la producción de los polipéptidoscaracterizados por SEQ ID NO: 2 según reivindicaciones5, 6, 7, 8 y 9. 11. 11. Un organismo hospedador eucariota, preferentemente la levadura Pichia pastoris, transformadocon la construcción formada según reivindicación 10. 12. 12. Un método para producir las formasrecombinantes correspondientes a las secuencias polipeptídicasdescritas en las reivindicaciones 5, 6, 7, 8 y 9, en el sistemaeucariótico de levadura Pichia pastoris, y preferentementede la cepa KM71, crecidas en medio rico, caracterizado poruna cromatografía de intercambio iónico enDEAE-celulosa, una de penetrabilidad en SephadexG-50 y una en una columna una de penetrabilidad enSephadex G-50 y una en una columnaC-18 de fase reversa de HPLC. 13. 13. Un método para producir las formasrecombinantes correspondientes a las secuencias polipeptídicasmencionadas en las reivindicaciones 5, 6, 7, 8 y 9, en el sistemaeucariótico de levadura Pichia pastoris y preferentemente dela cepa KM71 crecidos en medio mínimo, caracterizado por unacromatografía de intercambio en DEAE-celulosa, unade penetrabilidad en Sephadex G-50 y una en unacolumna C-18 de fase reversa de HPLC. 14. 14. Un método para el aislamiento del alergenoOle e 10 a partir del polen de Olea europaea utilizando unacromatografía de penetrabilidad en Sephadex G-75, una de penetrabilidad en Sephadex G-50 y unacolumna de fase reversa nucleosil C-18 de HPLC. 15. 15. Utilización de los péptidos de lasreivindicaciones 5-9 para la preparación decompuestos farmacológicos. 16. 16. Utilización de las moléculas segúnreivindicaciones 1-9 en el diagnóstico 17. invitro 18. 17. Aplicación de las moléculas recombinantes delas reivindicaciones 1-9 para el diseño de vacunasdestinadas a la inmunoterapia de la alergia. 19. 18. Aplicación de las moléculas recombinantes delas reivindicaciones 1-4 para producir péptidos, según reivindicaciones 5-9, que contengan al menosun epítopo T alergénico, capaces de actuar como vacunas. 20. 19. Aplicación de las moléculas recombinantes delas reivindicaciones 1-4 en la producción deisoformas recombinantes hipoalergénicas que tengan disminuida oanulada su unión a IgE para el tratamiento de alergias.