madrid2i

Resumen

Double inclusion procedure for the histological study and/or localization of molecular markers in pluricellular specimens with microscopic dimensions. The present invention refers to a double inclusion procedure of pluricellular specimens of microscopic dimensions (70-300 μm) that allows the three-dimensional spatial arrangement of the samples to be maintained and, subsequently, to carry out histological, immunohistochemical and/or localization studies. Molecular markers. The procedure includes the preparation of the sample by washing with buffered solution; fixing the sample for 10-15 minutes, at a temperature of 2-8º c; dehydration of the sample with increasing concentrations of ethanol for 10-15 minutes each, at a temperature of 2-8º c, preinclusion on agar and inclusion in paraffin, dispensing with the centrifugation of the sample at all stages of the process. Also, the invention includes a kit with the necessary elements to develop the procedure described in the invention. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Reivindicaciones

1. REIVINDICACIONES 1. Procedimiento de doble inclusión para el estudio histológico y/o de localización de marcadores moleculares de especímenes pluricelulares de dimensiones microscópicas que comprende los siguientes pasos: a) preparación de la muestra mediante lavados con solución tamponada y sin centrifugación previa; b) fijación de la muestra con un agente fijador durante un periodo de tiempo comprendido entre 10 y 15 minutos, a temperatura de 2-8°C; c) deshidratación de la muestra con concentraciones crecientes de etanol durante 10-15 minutos cada una, a una temperatura de 2-8°C; d) preinclusión de la muestra en agar sin centrifugación, transfiriendo dicha muestra desde la solución de etanol de deshidratación hasta una base de agar preparada previamente y en estado de gelificación por descenso térmico; e) inclusión en parafina. 2. Procedimiento según la reivindicación 1 que incluye un paso adicional f) de análisis histológico y/o de localización de marcadores moleculares. 3. Procedimiento según la reivindicación 2 en el que los análisis son inmunohistoquímicos. 4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que los especímenes pluricelulares tienen dimensiones comprendidas entre 70 y 300 μηη. 5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el tiempo de fijación de la muestra es de 15 minutos. 6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que el tiempo de deshidratación de la muestras es de 10 minutos con cada concentración de etanol. 7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que la deshidratación de la muestra se realiza con 3 concentraciones crecientes de etanol. 8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el que los especímenes pluricelulares de dimensiones microscópicas se seleccionan del grupo que comprende: embriones, cuerpos embrioides, neuroesferas, derivados de diferenciación de células pluripotentes, fases larvarias o adultas de parásitos, cultivos bacterianos, agregados de células procedentes de cultivos celulares o de aspirados celulares y/o modelos animales microscópicos. 9. Kit que comprende los elementos necesarios para procesar especímenes pluricelulares de dimensiones microscópicas mediante doble inclusión para su uso en el procedimiento definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-8.

Índice de la ficha

En detalle

Resumen

Reivindicaciones

Etiquetas