Resumen
A recombinant DNA (I), having a 567 base pair sequence (S1), given in the specification, encoding polypeptides with allergenic activity and containing at least one allergenic epitope in common with the Che a1 allergen of Chenopodium album, is new. Independent claims are also included for the following: (1) recombinant DNA (Ia) that hybridizes to sequence (S1) under highly stringent conditions; (2) recombinant DNA (Ib) having at least 60 % identity with sequence (S1) and encoding a polypeptide with the same allergenicity as Che a1 or reduced allergenicity (hypoallergenic); (3) recombinant polypeptide (II) corresponding to Che a1, or its fragments, having a 168 amino acid sequence (S2), given in the specification, and the antigenicity of at least one Che a1 epitope; (4) recombinant polypeptide (IIa) of allergens homologous to Che a1 in other (un)related species, and their fragments, having antigenicity as for (II); (5) polypeptides having sequences defined for (II) and (IIa) but with attenuated allergenicity; (6) eukaryotic expression vectors containing (I)-(Ib) and expressing the polypeptides of (3)-(5); (7) eukaryotic hosts transformed with the vectors of (6); (8) producing recombinant forms of the polypeptides of (3)-(5); and (9) isolating Che a1 from the pollen of C. album by gel-permeation chromatography on Sephadex G-75 then reversed-phase high performance liquid chromatography (HPLC) on Nucleosil C-18.
Reivindicaciones
1. 1. Moléculas de DNA recombinante caracterizadas por SEQ IDNO: 1 que codifican polipéptidos con actividad alergénica yque poseen al menos un epítopo alergénico común con elalergeno Che a 1 de Chenopodium album. 2. 2. Moléculas de DNA recombinante, o modificaciones de lasmismas, según reivindicación 1, que codifican polipéptidoscon, al menos, un epítopo de Che a 1 en su estructura,unido a un polipéptido adicional, o modificado química oenzimáticamente. 3. 3. Moléculas de DNA recombinante caracterizadas porhibridar en condiciones fuertemente restrictivas con ladescrita en SEQ ID NO 1. 4. 4. Moléculas de DNA recombinante caracterizadas porpresentar, al menos, un 60 % de identidad con la descrita enSEQ ID NO: 1, conteniendo una secuencia de nucleótidos que codifica unpolipéptido con actividad alergénica idéntica o reducida (hipoalergénica)con respecto a Che a 1. 5. 5. Polipéptido recombinante correspondiente al alergeno Chea 1 de Chenopodium album, o fragmentos de dichopolipéptido, según reivindicaciones 1 y 2, caracterizadopor la secuencia dada en SEQ ID NO: 2 y que presentan laantigenicidad de, al menos, un epítopo de Che a 1. 6. 6. Polipéptidos recombinantes del alergeno homólogo de Chea 1 en otras especies relacionadas y no relacionadasfilogenéticamente, o fragmentos de dichos polipéptidos,según reivindicaciones 3 y 4 que presentan la antigenicidadde, al menos, un epítopo de Che a 1. 7. 7. Polipéptidos que posean una secuencia de aminoácidossegún reivindicaciones 5 y 6, y que presenten unaalergenicidad atenuada. 8. 8. Polipéptidos o fragmentos de dichos polipéptidos depolen de Chenopodiaceas con, al menos, un epítopo de Che a1, según reivindicaciones anteriores, que se produzcanrecombinantes unidos a un polipéptido adicional. 9. 9. Polipéptidos de polen de Chenopodium album, segúnreivindicaciones anteriores, que estén modificados químicao enzimáticamente. 10. 10. Un vector de expresión eucariota, y preferentementepPICZa A, que contenga las secuencias caracterizadas por SEQ ID NO: 1,según reivindicaciones 1, 2, 3 y 4, cuya expresión dé lugar a la producciónde los polipéptidos carcterizados por SEQ ID NO: 1 y 2 según lasreivindicaciones 5, 6, 7, 8 y 9. 11. 11. Un organismo hospedador eucariota, preferentemente lalevadura Pichia pastoris, transformado con la construcciónformada según reivindicación 10. 12. 12. Un método para producir las formas recombinantescorrespondientes a las secuencias polipeptídicas descritasen las reivindicaciones 5, 6, 7, 8 y 9, en el sistemaeucariótico de levadura Pichia pastoris, y preferentementede la cepa KM71, crecidas en medio rico, caracterizado poruna cromatografía de intercambio fónico en DEAE-celulosa,una de penetrabilidad en Sephadex G-75 y una en una columnaC-18 de fase reversa de HPLC. 13. 13. Un método para producir las formas recombinantescorrespondientes a las secuencias polipeptídicasmencionadas en las reivindicaciones 5, 6, 7, 8 y 9, en elsistema eucariótico de levadura Pichia pastoris ypreferentemente de la cepa KM71 crecidos en medio mínimo,caracterizado por una cromatografía de penetrabilidad enSephadex G-75 y una en una columna C-18 de fase reversa deHPLC. 14. 14. Un método para el aislamiento del alergeno Che a 1 apartir del polen de Chenopodium album utilizando unacromatografía de penetrabilidad en Sephadex G-75 y otra ennucleosil C-18 de fase reversa de HPLC. 15. 15. Utilización de las moléculas, según reivindicaciones1-9, en el diagnóstico "in vitro" de la alergia. 16. 16. Aplicación de las moléculas recombinantes de lasreivindicaciones 1-9 para el diseño de vacunas destinadas ala inmunoterapia de la alergia. 17. 17. Aplicación de las moléculas recombinantes de lasreivindicaciones 1-4 para producir péptidos, segúnreivindicaciones 5-9, que contengan al menos un epítopo Talergénico, capaces de actuar como vacunas. 18. 18. Aplicación de las moléculas recombinantes de lasreivindicaciones 1-4 en la producción de isoformasrecombinantes hipoalergénicas que tengan disminuida oanulada su unión a IgE para el tratamiento de alergias.
