Resumen
The invention relates to the production of the recombinant allergen Ole e 9 from Olea europaea</i> in Pichia pastoris yeast for use in the diagnosis and treatment of allergies and to the system for isolating and purifying said allergen. The recombinant DNA coding for allergen Ole e 9 from olive pollen ( Olea europaea ) has been cloned and expressed. The above-mentioned allergen has beta -1,3-glucanase activity and shows high homology with said proteins. Proteins homologous with said allergen have also been detected in other pollens from other members of the oleacea family ( Syringa vulgaris , Ligustrum vulgare and Fraxinus excelsior ). The recombinant protein produced in the yeast ( Pichia pastoris ) is isolated with high yields, it is correctly bonded and shows immunological properties equivalent to those of the natural allergen. Hence, said protein and homologous proteins, the modified forms derived therefrom, the derived fragments containing at least one allergenic epitope can be used in diagnosis and immunotherapy protocols.
Reivindicaciones
1. Moléculas de DNA recombinante caracterizadas por SEQ ID NO: 1 que codifican polipéptidos con actividad alergénica que poseen al menos un epítopo alergénico común con el alergeno Ole e 9 de Olea europaea. 2. Moléculas de DNA recombinante, o modificaciones de las mismas, según reivindicación 1, que codifican polipéptidos con, al menos, un epítopo de Ole e 9 en su estructura, unido a un polipéptido adicional, o modificado química o enzimáticamente. 3. Moléculas de DNA recombinante caracterizadas por presentar, al menos, un 60 % de identidad con la descrita en SEQ ID NO: 1, conteniendo una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido con actividad alergénica idéntica o reducida (hipoalergénica) con respecto a Ole e 9. 4. Polipéptidos recombinantes del alergeno Ole e 9 de Olea europaea, o fragmentos de dichos polipéptidos, según reivindicaciones 1 y 2, caracterizados por las secuencias dadas en SEQ ID NO: 1, que presentan la antigenicidad de, al menos, un epítopo de Ole e 9. 5. Polipéptidos recombinantes del alergeno homólogo de Ole e 9 en otras especies relacionadas y no relacionadas filogenéticamente, o fragmentos de dichos polipéptidos, según reivindicación 3 que presentan la antigenicidad de, al menos, un epítopo de Ole e 9. 6. Polipéptidos o fragmentos de dichos polipéptidos de polen de Oleaceas con, al menos, un epítopo de Ole e 9, según reivindicaciones anteriores, que se produzcan recombinantes unidos a un polipéptido adicional. 7. Polipéptidos de polen de Olea europaea, Sy- ringa vulgaris y Ligustrum vulgare, según reivindicaciones anteriores, que estén modificados química o enzimáticamente. 8. Un vector de expresión eucariota, y preferentemente pPICZa A, que contenga las secuencias caracterizadas por SEQ ID NO: 1 según reivindicaciones 1, 2 y 3, cuya expresión dé lugar a la producción de los polipéptidos según reivindicaciones 4, 5, 6 y 7. 9. Un organismo hospedador eucariota, preferentemente la levadura Pichia pastoris, transformado con la construcción formada según reivindicación 8. 10. Un método para producir las formas recombinantes correspondientes a las secuencias polipeptídicas mencionadas en las reivindicaciones 4, 5, 6 y 7, en el sistema eucariótico de levadura Pichia pastoris y preferentemente de la cepa X-33, caracterizado por una cromatografía de intercambio iónico en DEAE-celulosa y una de afinidad en fenil-Sefarosa. 11. Utilización de las moléculas según reivindicaciones 1-9 en el diagnóstico "in vitro" de la alergia. 12. Aplicación de las moléculas recombinantes de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4, 5, 6 y 7 para el diseño de vacunas destinadas a la inmunoterapia de la alergia. 13. Aplicación de las moléculas recombinantes de las reivindicaciones 1-3 para producir péptidos, según reivindicaciones 4-7, que contengan al menos un epítopo T alergénico capaces de actuar como vacunas. 14. Aplicación de las moléculas recombinantes de las reivindicaciones 1-3 en la producción de isoformas recombinantes hipoalergénicas que tengan disminuída o anulada su unión a IgE para el tratamiento de alergias.
