Resumen
Racemasa bsrah for the racemization of amino acids. In the present invention, an aeromonas hydrophila racemase is included, which has a broad racemization spectrum and therefore allows obtaining l amino acids from the d enantiomer and from d amino acids from the l-enantiomer. Therefore, the present invention also refers to both to the use of said racemase in vitro as a method of amino acid racemisation. Furthermore, the present invention relates to a method of synthesis of muropºptidos. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Reivindicaciones
1. REIVINDICACIONES 2. 1. Uso de una enzima que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 95% de identidad con respecto a la secuencia SEQ ID NO: 1 como catalizador para la racemización de al menos un aminoácido seleccionado de la lista que comprende cisteína, histidina, lisina, leucina, metionina, asparragina, glutamina, arginina, serina, ornitina, homoserina y norleucina. 3. 2. Uso de una enzima según la reivindicación 1 donde la identidad con respecto a la secuencia SEQ ID NO: 1 es de al menos un 98%. 4. 3. Uso de una enzima según la reivindicación 2 donde la identidad con respecto a la secuencia SEQ ID NO: 1 es de al menos un 99%. 5. 4. Uso de una enzima según la reivindicación 3 donde la enzima comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1. 6. 5. Uso de una enzima según la reivindicación 4 donde la enzima consiste en la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1. 7. 6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 donde el aminoácido es al menos un aminoácido seleccionado de la lista que comprende la histidina, la lisina, la arginina, la ornitina y la glutamina. 8. 7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde la racemización se hace a partir de una mezcla enantiomérica. 9. 8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde la racemización se hace a partir de un enantiómero puro. 10. 9. Uso según la reivindicación 8 donde el enantiómero puro es el enantiómero L. 11. 10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, donde la racemización se hace a partir de una mezcla de aminoácidos. 12. 11. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 donde la enzima se encuentra inmovilizada. 13. 5 12. Método de racemización de aminoácidos que comprende poner en contacto al menos un aminoácido seleccionado de la lista que comprende cisteína, histidina, lisina, leucina, metionina, asparragina, glutamina, arginina, serina, ornitina, homoserina y norleucina con una enzima que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 95% de identidad con respecto a la secuencia SEQ ID NO: 1. 14. 13. Método según la reivindicación 12 donde la identidad con respecto a la secuencia SEQ ID NO: 1 es de al menos un 98%. 15. 14. Método según la reivindicación 13 donde la identidad con respecto a la secuencia 15 SEQ ID NO: 1 es de al menos un 99%. 16. 15. Método según la reivindicación 14 donde la enzima comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1. 17. 20 16. Método según la reivindicación 15 donde la enzima consiste en la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1 18. 17. Método según cualquiera de las reivindicaciones 12 a 16 donde el aminoácido es 19. al menos un aminoácido seleccionado de la lista que comprende la histidina, la lisina, 25 la arginina, la ornitina y la glutamina. 20. 18. Método según cualquiera de las reivindicaciones 12 a 17 donde la racemización se hace a partir de una mezcla enantiomérica. 21. 30 19. Método según cualquiera de las reivindicaciones 12 a 17 donde la racemización se hace a partir de un enantiómero puro. 22. 20. Método según la reivindicación 19 donde el enantiómero puro es el enantiómero L. 23. 21. Método según cualquiera de las reivindicaciones 12 a 20, donde la racemización se hace a partir de una mezcla de aminoácidos. 24. 22. Método según cualquiera de las reivindicaciones 12 a 21 donde la enzima se encuentra inmovilizada. 25. 23. Método de producción de un muropéptido que comprende: a) poner en contacto al menos un L-aminoácido seleccionado de la lista que comprende cisteína, histidina, lisina, leucina, metionina, asparragina, glutamina, arginina, serina, ornitina, homoserina y norleucina con una enzima que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 95% de identidad con respecto a la secuencia SEQ ID NO: 1 para racemizar el aminoácido a su forma D, y b) poner en contacto el D-aminoácido obtenido en (a) con un muropéptido y al menos una L, D transpeptidasa y/o al menos una ligasa. 26. 24. Método según la reivindicación 23 donde la identidad de la enzima con respecto a la secuencia SEQ ID NO: 1 es de al menos un 98%. 27. 25. Método según la reivindicación 24 donde la identidad de la enzima con respecto a la secuencia SEQ ID NO: 1 es de al menos un 99%. 28. 26. Método según la reivindicación 25 donde la enzima comprende la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1. 29. 27. Método según la reivindicación 26 donde la enzima consiste en la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1. 30. 28. Método según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 27 donde el muropéptido que se sintetiza es un muropéptido no canónico. 31. 29. Método según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 28 donde el aminoácido del paso (a) se encuentra en forma de mezcla enantiomérica. 32. 30. Método según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 28 donde el aminoácido del paso (a) se encuentra en una forma enantiomérica pura. 33. 31. Método según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 30 donde el aminoácido del paso (a) se encuentra en una mezcla de aminoácidos. 34. FIG 1 35. BsrAh 36. FIG.2 37. FIG.3 38. FIG.4 39. FIG.5 40. FIG.6 41. FIG.7 42. FIG.8 43. FIG.9 44. FIG.10 45. FIG.11 46. FIG.12 47. FIG.13 48. FIG.14 49. FIG.15 A 50. FIG.15 B 51. LISTADO DE SECUENCIAS 52. <110> Universidad Autónoma de Madrid 53. <120> Racemasa BsrAh para la racemización de aminoácidos 54. <130> ES1595.48 55. <160> 3 56. <170> PatentIn version 3.5 57. <210> 1 58. <211> 408 59. <212> PRT 60. <213> Aeromonas hydrophila 61. <400> 1 62. Met His Lys Lys Thr Leu Leu Ala Thr Leu Ile Leu Gly Leu Leu Ala 1 5 10 15 63. Gly Gln Ala Val Ala Ala Pro Tyr Leu Pro Leu Ala Ser Asp His Arg 20 25 30 64. Asn Gly Glu Val Gln Thr Ala Ser Asn Ala Trp Leu Glu Val Asp Leu 35 40 45 65. Gly Ala Phe Glu His Asn Ile Gln Thr Leu Lys Asp Arg Leu Gly Asp 50 55 60 66. Lys Gly Pro Lys Ile Cys Ala Ile Met Lys Ala Asp Ala Tyr Gly His 65 70 75 80 67. Gly Ile Asp Leu Leu Val Pro Ser Val Val Lys Ala Gly Ile Pro Cys 85 90 95 68. Ile Gly Ile Ala Ser Asn Glu Glu Ala Arg Val Ala Arg Glu Lys Gly 100 105 110 69. Phe Thr Gly Arg Leu Met Arg Val Arg Ala Ala Thr Pro Ala Glu Val 115 120 125 70. Glu Gln Ala Leu Pro Tyr Lys Met Glu Glu Leu Ile Gly Ser Leu Val 130 135 140 71. Ser Ala Gln Gly Ile Ala Asp Ile Ala Gln Arg His His Thr Asn Ile 145 150 155 160 72. Pro Val His Ile Ala Leu Asn Ser Ala Gly Met Ser Arg Asn Gly Ile 165 170 175 73. Asp Leu Arg Leu Ala Asp Ser Lys Glu Asp Ala Leu Ala Met Leu Lys 180 185 190 74. Leu Lys Gly Ile Thr Pro Val Gly Ile Met Thr His Phe Pro Val Glu 195 200 205 75. Glu Lys Glu Asp Val Lys Met Gly Leu Ala Gln Phe Lys Leu Asp Ser 210 215 220 76. Gln Trp Leu Leu Glu Ala Gly Lys Leu Asp Arg Ser Lys Ile Thr Ile 225 230 235 240 77. His Ala Ala Asn Ser Phe Ala Thr Leu Glu Val Pro Asp Ala Tyr Phe 245 250 255 78. Asp Met Val Arg Pro Gly Gly Leu Leu Tyr Gly Asp Ser Ile Pro Ser 260 265 270 79. Tyr Thr Glu Tyr Lys Arg Val Met Ala Phe Lys Thr Gln Val Ala Ser 275 280 285 80. Val Asn His Tyr Pro Ala Gly Asn Thr Val Gly Tyr Asp Arg Thr Phe 290 295 300 81. Thr Leu Lys Arg Asp Ser Trp Leu Ala Asn Leu Pro Leu Gly Tyr Ser 305 310 315 320 82. Asp Gly Tyr Arg Arg Ala Leu Ser Asn Lys Ala Tyr Val Leu Ile Gln 325 330 335 83. Gly Gln Lys Val Pro Val Val Gly Lys Thr Ser Met Asn Thr Ile Met 340 345 350 84. Val Asp Val Thr Asp Leu Lys Gly Val Lys Pro Gly Asp Glu Val Val 355 360 365 85. Leu Phe Gly Arg Gln Gly Glu Ala Glu Val Lys Gln Ala Asp Leu Glu 370 375 380 86. Glu Tyr Asn Gly Ala Leu Leu Ala Asp Met Tyr Thr Ile Trp Gly Tyr 385 390 395 400 87. Thr Asn Pro Lys Lys Ile Lys Arg 405 88. <210> 2 89. <211> 29 90. <212> DNA 91. <213> Secuencia artificial 92. <220> 93. <223> Oligonucleótido sentido 94. <400> 2 aaaccatggc cccaagaaga tcaagcgct 29 95. <210> 3 96. <211> 46 97. <212> DNA 98.  <213>	Secuencia artificial 99.  <220> <223>	Oligonucleótido antisentido 100.  <400> 3 aaaaagcttg cgcttgatct tcttggggtt ggtgtagccc cagatg	46
