Resumen
Use of the ncsrs9 gene and the ncsrs9 protein for the prevention and diagnosis of neosporosis. The present invention relates to the polynucleotide molecule corresponding to the ncsrs9 gene of neospora caninum and the antigen it encodes, ncsrs9, protein expressed during the bradyzoite stage; likewise, it refers to the primers, the recombinant vectors, the transformed or transfected host cells and the recombinantly expressed proteins derived from said gene, as well as to the use of these products and the specific antibodies produced against them as reagents for techniques for direct detection of the parasite, from samples of infected animals, and for the production of vaccines against the disease. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Reivindicaciones
1. 1. Molécula polinucleotídica caracterizada por SEQ ID NO: 13 que consiste en el gen NcSRS9 de Neospora caninum y codifica la proteína NcSRS9 de Neospora caninum caracterizada por SEQ ID NO: 15. 2. 2. Molécula polinucleotídica caracterizada por SEQ ID NO: 14 que comprende la secuencia polinucletídica definida en la reivindicación 1. 3. 3. Molécula polinucleotídica con al menos un 95% de identidad con las moléculas polinucleótídicas definidas en las reivindicaciones 1 ó 2. 4. 4. Método para detectar N caninum a partir de tejidos animales mediante PCR o RTPCR o mediante sondas de ADN que incluye cualquiera de los oligonucleótidos F3.2BSR4, F4.2BSR4, SECF1, SECF2, F5BSR4, F6BSR4, F7BSR4, F8BSR4, NcSRS9F, NcSRS9R2, FoSRS9KpnI y ReSRS9SacI, caracterizados por SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 Y 12, como cebadores o como sondas. 5. 5. Vector recombinante que comprende una secuencia nucleotídica definida en las reivindicaciones 1, 2 ó 3. 6. 6. Células eucariotas hospedadoras transfectadas con los vectores recombinantes de la reivindicación 5. 7. 7. Células procariotas hospedadoras transformadas con los vectores recombinantes de la reivindicación 5. 8. 8. Polipéptido sustancialmente purificado o aislado seleccionado de (a) la proteína antigénica NcSRS9 de N caninum, caracterizada por SEQ ID NO:15; (b) polipéptidos derivados o formas truncadas con al menos un 90% de identidad con la proteína NcSRS9 (SEQ ID NO: 15) y que conservan sus características antigénicas; o (c) 9. proteínas recombinantes que incluyen NcSRS9 (SEQ ID NO: 15) o incluyen polipéptidos derivados de NcSRS9 y que conservan sus características antigénicas. 10. 9. Polipéptido según la reivindicación 8 que incluye desde el aminoácido 40 al aminoácido 375 de SEQ ID NO: 15. 11. 10. Método para producir un polipéptido que comprende el cultivo de las células hospedadoras de las reivindicaciones 6 ó 7 en condiciones que permiten la expresión de un polipéptido definido en cualquiera de las reivindicaciones 8 ó 9. 12. 11. Anticuerpos monoclonales o policlonales específicos frente a los polipéptidos definidos en las reivindicaciones 8 y 9. 13. 12. Método para la detección de N caninum a partir de tejidos animales mediante inmunohistoquímica o inmunofluorescencia o cualquier otra técnica basada en la detección directa del parásito mediante anticuerpos que incluye anticuerpos monoclonales o policlonales específicos definidos en la reivindicación 11. 14. 13. Composición inmunogénica o formulación vacunal que comprende: (a) un polipéptido definido en las reivindicaciones 8 y 9; (b) una molécula polinucleotídica según las reivindicaciones 1-3; (c) un vector recombinante como el definido en la reivindicación 5; (d) las células hospedadoras transfectadas según reivindicación 6; o 15. (e) las células hospedadoras transformadas según reivindicación 7. 16. 14. Composición inmunogénica o formulación vacunal según la reivindicación 13, que comprende un adyuvante, una o varias cito quinas o partículas no infecciosas similares a las cápsides víricas (VLP) . 17. 15. Kit de vacunación para mamíferos contra la neosporosis que comprende un contenedor que incluye una composición inmunogénica o formulación vacunal según cualquiera de las reivindicaciones 13 ó 14.
