Resumen
A Sus scrofa vaccine virus against African swine fever (Armenia/07) and genotype II derivatives). A field isolate of ASFV known as Lv17/WB/Rie1 is obtained and characterised in this invention. The Sus scrofa vaccine virus strain against African swine fever (Armenia/07 and genotype II derivatives) was isolated from a wild boar hunted in Rietumpieriga (Engures, Smardesu), Latvia, in February 2017. The virus has been characterised as the first non-haemoadsorbent (no-HAD) ASFV isolate from genotype II. The nucleotide sequence for the gene EP402R in the Lv17/WB/Rie1 vaccine isolate responsible for the HAD phenomenon contains a mutation in the reading frame. This modification is not present in HAD viruses from genotype II. The use of molecular techniques with specific primers for that full sequence will allow vaccinated and unvaccinated animals to be differentiated. In addition, the vaccine tests carried out show that this vaccine induces a very high level of protection, specifically 92.86%, against the highly virulent Armenia/07 isolate. Finally, the in vitro growth characteristics of the vaccine isolate Lv17/WB/Rie1 have been evaluated by culturing same in primary porcine peripheral blood monocyte (PBM) cultures obtained from the peripheral blood of domestic pigs. After a first pass of the vaccine virus in cell culture, the virus was collected to create a stock of Lv17/WB/Rie vaccine virus.
Reivindicaciones
1. REIVINDICACIONES 1 Virus de peste porcina africana denominado Lv17/ B/Rié1 codificado por una molécula de AON que tiene la secuencia de nucieótidos SEC ID N°1, que es homologa a la secuencia de nucieótidos que contiene el genoma del virus de referencia de peste porcina africana Georgia 2007/1 (publicada con N<®>de acceso de GenRank FR682468} excepto por las siguientes modificaciones (referidas todas ellas, excepto cuando se señala io contrarío, a las posiciones del genoma de Georgia 2007/1): (i) inserciones de nucieótidos en regiones no codificantes en las posiciones 104 (A), 412 (A), 433 (T), 440 (A), 5869 (A), 85G5 (A), 10465 (A), 19461 (T . 20669 (A), 20835 (7), 23027 (A), 42616 (TT), 44547 (T), 47321 (A), 63845 (T), 63860 (A), 63867 (T), 63876 (T), 81818 (A), 1 13166 (A), 133463 (A). 143757 (A), 169454 (I), 169462 (A), 173565 (A), 183305 |T) y 186352 (T); (lí) delaciones de nucieótidos en regiones no codificantes en ias posiciones 19170 (T) y 20825 (GGG); ííi) una inserción da una secuencia repetida en tándem de 10 nucieótidos en la posición 172402; (iv> un GF~38Q-1 L motado en su secuencia y truncado en dos péptidos de 106 y 278 aminoácidos debido a: una mutación en el nucleótido 1146 (A a G), una mutación en ias posiciones 1176 y 1184 (T a A), una mutación en ia posición 1182 (T a C), una mutación en las posiciones 183 y 1201 (A a C), una inserción de 3 nucieótidos (TAC) en la posición 1204, una mutación en ia posición 1208 (C a T), una delación de doble nucleótido (TT) en la posición 1605 y una inserción de nucleótido (T) e la posición 1622; (v) una inserción de nucleótido (A) en la posición 5670 que trunca e! péptido ASFVJ3<J>ACD )007O; (vi) un MGF-110-11 de menor íongltud (198 aminoácidos) debido a una sustitución de nucleótido (C a T) en la posición 8095; (vil) un ASFV<„>G<„>ACD<„>001 0 de mayor longitud (74 aminoácidos) debido a dos inserciones de nucieótidos (A) en las posiciones 7823 y 7940; (vi) un ORF p285L identificado debido a ia sustitución de nucleótido (T a C) en la posición 10305; (íx) un MGF-110-11 L fusionado originando una proteica de 271 aminoácidos debido a la delación de 4 nucieótidos (GCGC) en la posición 13266; (x) un A$FV<„>G<„>ACD<„>0024Q<:>de mayor longitud: (36 aminoácidos) debido a una inserción de nucleótido (A) en la posición 13685; (xi) dos ORF MGF-1 10-13L y MGF-110-14L separados (158 y 128 aminoácidos<*>respectivamente) debido a una deleoión de 7 nucieótidos (CGCGGCC) en ia posición 14697; (xii) un A8FV<„>G<„>ACD_06290 truncado debido a una deleoión de doble nucleótido (GG) en ia posición 16663; (xiü) un ASFVJ3_ACDJ)Q350 más pequeño debido a una deleoión de 8 nucieótidos (GGGGGG) en la posición 19033; fxiv) un ORF yGF-3ÜG-2R originado por la inserción de un nucleótido (A) en ía posición 27 HOJA DE REEMPLAZO (REGLA 26) 21588; <xv) una sustitución de aminoácido (Lys323Giu en ORF GF-505-9R) debido a una mutación de nucleótitío (A a G) en la posición 43599; (xvi) un EP402R truncado debido a una delación de nucleótido (A) en la posición 73783; (xvii) una sustitución de nucleótido sinónima (C a T) en la posición 91488 dentro del ORF C982R; (xviií) un CP204L de menor longitud (194 aminoácidos) debido a una inserción de doble nucleótido (TT) en la posición 124803; (xix) una sustitución de aminoácido (Asn414Ser en ORF NP419L) debido a una mutación de nucteótído (T a C) en ia posición 133521; un GP383R con 12 aminoácidos modificados (Asn^ts-Lys-Tyr-Asn-Thr-Tyr-Ala^ValHiS" G!u-Asn~Phe<2S4>a lie^s-AsnT<'>hrdle-His-Thr-Leu-Phe^et-L s-Thr-Leuss<*?>debido a una delación de nucleótido (A) en la posición 161 52 y una inserció de nucteótído (A) en ia posición 181292; (xx) una sustitución de aminoácido (!le195PNe en ORF I287L) debido a una mutación de nucleótido (T a A) en la posición 189682; (xxi) un I177L de mayor longitud (177 aminoácidos) debido a una inserción de nucleótido (A) en ia posición 174954; xxü) un MFG-36Q-18R de mayor longitu (352 aminoácidos) debido a una inserción de nucteótído (A) en la posición 177493; (xxiii) un ASFV_G_ACD_001940 de mayor longitud (52 aminoácidos) debido a una deieeión de nucleótido (?) en la posición 184988; (xxiv) una deieeión de 422 nucleótidos entre las posiciones 187777 y 188198 (da Georgia 2007/1 ) reemplazada por una inserción de 715 nucleótidos en las posiciones 187801 a 188515 de Lv17/ B/Rie1 que produce ia eliminación de! péptido ASFV_G_ACD Q1980, la extensión y la variación en ia composición de aminoácidos de MGF360-21 R y la generación de un nuevo GRF DP93R; (xxv) un DP80R de mayor longitud (59 aminoácidos) debido a una inserción de nucleótido (A) en la posición 2. Utilización del virus vacunal tv17/WB/Riel conforme a la reivindicación 1, por cualquier vía (oral, Intramuscular intradérmicá, conjuntiva! etc), para la protección de Sus Scrofa (jabalíes y cerdo doméstico) frente ai virus de la Peste porcina africana, en concreto frente al aislado Armenia/07 y sus derivados pertenecientes ai genotipo i i o a cualquiera de ios otros genotipos deí virus para los que pueda ser efectiva esta cepa vacunal· asi como los cambios en el genoma viral descritos en esta patente, mediante detección u otros métodos, encaminados mejorar su capacidad de protección 3. Método para diferenciar entre animales infectados y vacunados, diagnóstico DIVA, mediante la detección de las características genéticas diferenciales de todos o algunos de los elementos de la secuencia del genoma descrita del virus vacunal 28 HOJA DE REEMPLAZO (REGLA 26) Lv17A ¾©1 conforme a la reivindicación 1 empleando una muestra aislada de un animal. 4. Método do diferenciación entre anímales infectados con virus virulento y el virus vacunal Lv17/WB/Rie1 según reivindicación tercera, medíante la amplificación por reacción en cadena de la poli erasa y posterior secuendación del fragmento del ídentificador diferencial del gen EP402R (responsable del fenómeno de hemadsorción). 28 HOJA DE REEMPLAZO (REGLA 26)
