madrid2i

Resumen

Method for diagnosing and monitoring the effectiveness of dry-eye treatment. The present invention relates to a method for diagnosing dry eye in patients with said pathology and for monitoring the effectiveness of the treatment by means of the concentration of the diadenosine tetraphosphate dinucleotide (Ap4A). This method makes it possible to analyse the concentrations of the diadenosine tetraphosphate compound (Ap4A) of a tear sample from the patient in order to determine the presence thereof, which in cases of dry eye is abnormally high. In this way, it is possible objectively to confirm or to discount the presence of this pathology. The diagnostic method of the present invention comprises: detection by means of the high-pressure liquid chromatography (HPLC) technique of the Ap4A molecule, for the purposes of the calculation of which use will be made of a standard sample of Ap4A of commercial origin and of known concentration; and the use of a luminometric method for the detection and quantification of the Ap4A dinucleotide by means of the use of luciferin/luciferase.

Reivindicaciones

1. 1. Método de análisis in vitro para eldiagnóstico del ojo seco y/o seguimiento de la efectividad deltratamiento en pacientes con dicha patología, que comprende recogeruna muestra de lágrima para determinar la concentración de Ap4Apresente en la lágrima. 2. 2. Método de análisis in vitro para eldiagnóstico del ojo seco y/o seguimiento de la efectividad deltratamiento en pacientes con dicha patología, según reivindicación1, caracterizado porque la concentración de Ap4A presente enla lágrima se realiza por análisis cromatográfico. 3. 3. Método de análisis in vitro para eldiagnóstico del ojo seco y/o seguimiento de la efectividad deltratamiento en pacientes con dicha patología, según reivindicación1, caracterizado porque la concentración de Ap4A presente enla lágrima se realiza por análisis luminométrico. 4. 4. Método de análisis in vitro para eldiagnóstico del ojo seco y/o seguimiento de la efectividad deltratamiento en pacientes con dicha patología, según reivindicación1, caracterizado porque la muestra de lágrima es recogidapor medio de una tira de papel secante (test de Schirmer) , pormedio de un tubo capilar, por medio de una pipeta u otro sistema deaspiración. 5. 5. Método de análisis in vitro para eldiagnóstico del ojo seco y/o seguimiento de la efectividad deltratamiento en pacientes con dicha patología, según reivindicaciones1 y 2, caracterizado porque las condiciones cromatográficaspara la determinación incluyen una fase móvil con 10 mM deKH2PO4, 2 mM tetrabutil amonio y 10-17%de acetonitrilo todo ello a pH 7.5 y condiciones de detección254-260 nm de longitud de onda. 6. 6. Método de análisis in vitro para eldiagnóstico del ojo seco y/o seguimiento de la efectividad deltratamiento en pacientes con dicha patología, según reivindicaciones1 y 2, caracterizado porque las condiciones cromatográficaspara la detección contienen una fase móvil con 0.1 mMKH2PO4, 3-5% metanol, pH 6.5 y condicionesde detección 254-260 nm de longitud de onda. 7. 7. Método de análisis in vitro para eldiagnóstico del ojo seco y/o seguimiento de la efectividad deltratamiento en pacientes con dicha patología, según reivindicaciones1 y 3, caracterizado porque en el método luminométrico unaalícuota de lágrima es calentada a 100ºC, se incuba con unacantidad enzimáticamente activa deluciferín-luciferasa y donde posteriormente seañade un volumen enzimáticamente activo de fosfodiesterasa deCrotalus durissus (EC 3.1.15.1) o alternativamente deCrotalus adamanteus (EC 3.1.4.1) para medir la concentracióndel Ap4 a partir de su producto de hidrólisis por emisión deluz producida.

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