Resumen
New fructofuranosidase activity of rhodotorula to obtain prebiotic oligosaccharides. An industrially viable process for obtaining prebiotic oligosaccharides is provided to be used as functional ingredients in dietetic products, dairy products, baby foods and animal feeds, using a new fructofuranosidase enzyme from rhodotorula. A process for obtaining an enzymatic product with fructofuranosidase activity, as well as the substantially pure enzyme with this activity is also provided. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)
Reivindicaciones
1. 1. Procedimiento de obtención de un productoenzimático con actividad fructofuranosidasa, que comprende cultivarcélulas de Rhodotorula en un medio mínimo o rico paralevaduras basado en distintas fuentes de carbono (maltosa, rafinosa, sacarosa) a una temperatura comprendida entre 28 y 30ºC yun rango de agitación orbital constante comprendido entre 150 y 250rpm. 2. 2. Procedimiento según la reivindicación 1 quecomprende cultivar células de Rhodotorula en un medio paralevaduras basado en maltosa, a una temperatura de 30ºC y agitaciónorbital constante de 235 rpm. 3. 3. Procedimiento según cualquiera de lasreivindicaciones 1 y 2, que además comprende el paso de recuperarel producto enzimático del medio de cultivo y/o de las células. 4. 4. Procedimiento según cualquiera de lasreivindicaciones 1-3, donde las células deRhodotorula pertenecen a una cepa seleccionada del grupo queconsiste en R. mucilaginosa (CECT 10044, CECT 10059, CECT10087, CECT 10291 y CECT 10359) , R. gracilis ATCC 1416 yR. rubra ATCC 90687. 5. 5. Producto enzimático con actividadfructofuranosidasa obtenible por el procedimiento definido encualquiera de las reivindicaciones 1-4. 6. 6. Producto enzimático según la reivindicación5, caracterizado porque la actividad fructofuranosidasatiene baja especificidad de sustrato, actuando sobre sacarosa, 1-kestosa, nistosa, palatinosa, turanosa yleucrosa. 7. 7. Producto enzimático según cualquiera de lasreivindicaciones 5 y 6, caracterizado porque no tieneactividad fructofuranosidasa sobre lactosa, maltosa ymaltotriosa. 8. 8. Producto enzimático según cualquiera de lasreivindicaciones 5-7, donde la actividadfructofuranosidasa presenta un máximo en el intervalo de pH entre4.5 y 5.5 a 42ºC, y en un intervalo de temperatura de 40 a 60ºC. 9. 9. Producto enzimático según cualquiera de lasreivindicaciones 5-8, caracterizado porquetiene actividad fuctosiltransferasa en presencia de uno o variossustratos glucídicos. 10. 10. Producto enzimático según la reivindicación9, caracterizado porque los productos glucídicos sonfructooligosacáridos. 11. 11. Producto enzimático según la reivindicación10, donde los productos resultantes de la actividadfructosiltransferasa son oligosacáridos con enlaces yβ-2, 1, y β-2, 6. 12. 12. Producto enzimático según la reivindicación11, donde el producto resultante de la actividad transfructosilasaes básicamente la 6-kestosa. 13. 13. Procedimiento de obtención de oligosacáridosque comprende permitir que el producto enzimático definido encualquiera de las reivindicaciones 5-12 actúe sobreuno o varios sustratos glucídicos. 14. 14. Procedimiento de obtención de una enzimasustancialmente pura con actividad fructofuranosidasa, a partir delproducto enzimático obtenido por el procedimiento según lasreivindicaciones 1 y 2, que comprende la etapa adicional depurificar el producto enzimático hasta obtener la enzimasustancialmente pura. 15. 15. Procedimiento según la reivindicación 14, donde las células de Rhodotorula pertenecen a una cepaseleccionada del grupo que consiste en Rhodotorulamucilaginosa (CECT 10044, CECT 10059, CECT 10087, CECT 10291 yCECT 10359) , Rhodotorula gracilis ATCC 1416 y Rhodotorularubra ATCC 90687. 16. 16. Enzima sustancialmente pura con actividadfructofuranosidasa obtenible por el procedimiento definido encualquiera de las reivindicaciones 14 y 15. 17. 17. Enzima según la reivindicación 16, caracterizada porque la actividad fructofuranosidasa tienebaja especificidad de sustrato, actuando sobre sacarosa, rafinosa, 1-kestosa, nistosa, palatinosa, turanosa yleucrosa. 18. 18. Enzima según cualquiera de lasreivindicaciones 16 y 17, caracterizada porque no tieneactividad fructofuranosidasa sobre lactosa, maltosa ymaltotriosa, 19. 19. Enzima según cualquiera de lasreivindicaciones 16-18, donde la actividadfructofuranosidasa presenta un máximo en el intervalo de pH entre4.5 y 5.5 a 42ºC, y en un intervalo de temperatura entre 40 y60ºC. 20. 20. Enzima según cualquiera de lasreivindicaciones 16-19, caracterizada porquetiene actividad fructosiltransferasa en presencia de uno o variossustratos glucídicos. 21. 21. Enzima según la reivindicación 20, caracterizada porque los productos glucídicos sonfructooligosacáridos. 22. 22. Enzima según la reivindicación 21, donde losproductos resultantes de la actividad fructosiltransferasa sonoligosacáridos con enlaces β-2, 1, yβ-2, 6. 23. 23. Enzima según la reivindicación 22, donde losproductos resultantes de la actividad fructosiltransferasa sonbásicamente 6-kestosa, neokestosa y1-kestosa. 24. 24. Enzima según cualquiera de lasreivindicaciones 16-23, caracterizada portener un peso molecular en condiciones desnaturalizantes de 172kDa. 25. 25. Procedimiento de obtención de oligosacáridosque comprende permitir que la enzima definida en cualquiera de lasreivindicaciones 16-24 actúe sobre uno o variossustratos glucídicos.
