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Producing riboflavin variants by DNA cloning and expression comprises isolation of recombinant proteins of e.g. Escherichia coli for use in e.g. immunologyCM Patents

Índice de la ficha

Updated at
24/07/2026
Numero publicacion
ES.2241383.A1
Fecha publicacion
16/10/2005
Numero solicitud
ES20020000562
Fecha presentacion
08/03/2002

En detalle

Resumen

The production of riboflavin variants by DNA cloning and expression has isolation of the recombinant proteins of Escherichia coli or of Pichia pastoris for purification. The products have immunological enzymatic and cytotoxic properties similar to those of the natural fungus proteins.

Reivindicaciones

1. 1. Moléculas de DNA recombinantecaracterizadas por SEQ ID NO: 1 que codifican péptidos conactividad ribonucleolítica y que poseen al menos un epítopoalergénico común con el alergeno principal de Aspergillusspp. denominado Aspfl. 2. 2. Moléculas de DNA recombinantecaracterizadas por SEQ ID NO: 1 que codifican péptidos conpropiedades citotóxicas y/o alergénicas atenuadas. 3. 3. Moléculas de DNA recombinantecaracterizadas por SEQ ID NO: 1 que codifican péptidos concapacidad alterada, con respecto a laα-sarcina, para interaccionar con membranaslipídicas. 4. 4. Moléculas de DNA recombinante, segúnreivindicaciones anteriores, o modificaciones de las mismas, quecodifican polipéptidos unidos a un polipéptido adicional, omodificados química o enzimáticamente. 5. 5. Polipéptidos recombinantes deΔ (7-22) sarcina, o fragmentos dedichos polipéptidos, según reivindicaciones anteriores, caracterizados por la secuencia dada en SEQ ID NO: 1 y 2, quepresentan la antigenicidad de, al menos, un epítopo de Aspf1. 6. 6. Polipéptidos recombinantes deΔ (7-22) sarcina, o fragmentos dedichos polipéptidos, según reivindicaciones 1, 2, 3 y 4, caracterizados por la secuencia dada en SEQ ID NO: 1 y 2, quepresentan actividad ribonucleolítica alterada con respecto a laα-sarcina y la RNasa U2. 7. 7. Polipéptidos recombinantes deΔ (7-22) sarcina, o fragmentos dedichos polipéptidos, según reivindicaciones 1, 2, 3 y 4, caracterizados por la secuencia dada en SEQ ID NO: 1 y 2, quepresentan actividad citotóxica alterada con respecto a laα-sarcina y la RNasa U2. 8. 8. Polipéptidos recombinantes deΔ (7-22) sarcina, o fragmentos dedichos polipéptidos, según reivindicaciones 1, 2, 3 y 4, caracterizados por la secuencia dada en SEQ ID NO: 1 y 2, quepresentan una capacidad alterada para interaccionar con membranascon respecto a la α-sarcina y la RNasaU2. 9. 9. Un vector de expresión procariota, ypreferentemente pINPG o pET, que contenga cualquiera de lassecuencias de nucleótidos descritas en las reivindicaciones 1 a 4, y que permita la producción recombinante de cualquiera de lospolipéptidos según reivindicaciones 5 a 8. 10. 10. Un vector de expresión eucariota, ypreferentemente pHILD2, pHILS1, pPIC9 o pPICZα, que contengacualquiera de las secuencias de nucleótidos descritas en lasreivindicaciones 1 a 4, y que permita la producción recombinante decualquiera de los polipéptidos según reivindicaciones 5 a 8. 11. 11. Un organismo hospedador procariota, transformado con un vector según reivindicación 9. 12. 12. Un organismo hospedador eucariota, transformado con un vector según reivindicación 10. 13. 13. Un método para producir polipéptidosrecombinantes, según reivindicaciones 5, 6, 7, 8, 9 y 11, en elsistema procariota de bacteria Escherichia coli ypreferentemente de la cepa BL21 (DE3) , caracterizadopor una cromatografía de intercambio iónico en AmberlitaIRC-50 y una de penetrabilidad en Biogel P10. 14. 14. Un método para producir polipéptidosrecombinantes, según reivindicaciones 5, 6, 7, 8, 10 y 12, en elsistema eucariota de levadura Pichia pastoris ypreferentemente de las cepas GS115 y KM71, caracterizado poruna cromatografía de intercambio iónico en AmberlitaIRC-50 y una de penetrabilidad en Biogel P10. 15. 15. Utilización de las moléculas, segúnreivindicaciones 1-14, en el diagnóstico invitro de la alergia. 16. 16. Aplicación de las moléculas recombinantes, según reivindicaciones 1-14, para el diseño devacunas destinadas a la inmunoterapia de la alergia. 17. 17. Aplicación de las moléculas recombinantessegún reivindicaciones 1-14 para producir péptidosque contengan al menos un epítopo T del alergeno Aspfl y seancapaces de actuar como vacunas. 18. 18. Aplicación de las moléculas recombinantes, según reivindicaciones 1-14, para la producción deisoformas recombinantes hipoalergénicas que tengan disminuida oanulada su unión a IgE para el tratamiento de alergias. 19. 19. Aplicación de las moléculas recombinantes, según reivindicaciones 1-14, para la producción depolipéptidos recombinantes con citotoxicidad modificada.

Etiquetas

Inventores
Gavilanes Franco Jose GOnaderra Sanchez MercedesMartinez del Pozo Alvaro
Solicitantes
Universidad Complutense de Madrid
Clasificacion ipc
C07K 16/ 14 A IC12N 15/ 56 A IC12N 9/ 22 A IG01N 33/ 68 A I
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